【摘 要】
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目的：构建TFEB基因的shRNA慢病毒载体，并鉴定是否成功。采用该载体包装的慢病毒侵染所获得的细胞系可利用TFEB（转录因子EB）作为靶点，用于TFEB相关性疾病发病机制的研究及为临床疾病研究提供新的药物治疗方向。方法：利用PCR、双酶切、连接、转化等分子生物学技术构建TFEB基因的shRNA慢病毒载体，利用测序鉴定序列是否连接成功；通过RNAi技术，将构建成功的重组质粒包装成慢病毒并侵染细胞，
【基金项目】
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内蒙古医科大学科技百万工程项目（YKD2018KJBW015）； 内蒙古医科大学2022年大学生科技创新“英才培育”项目（YCPY2022154）；
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目的：构建TFEB基因的shRNA慢病毒载体，并鉴定是否成功。采用该载体包装的慢病毒侵染所获得的细胞系可利用TFEB（转录因子EB）作为靶点，用于TFEB相关性疾病发病机制的研究及为临床疾病研究提供新的药物治疗方向。方法：利用PCR、双酶切、连接、转化等分子生物学技术构建TFEB基因的shRNA慢病毒载体，利用测序鉴定序列是否连接成功；通过RNAi技术，将构建成功的重组质粒包装成慢病毒并侵染细胞，建立敲低TFEB的细胞系，利用Western blot检测侵染及对照HeLa细胞TFEB蛋白表达水平。结果：测序结果显示pLKO.1-TFEB-shRNA重组质粒分别包含3U、OR不同干扰序列，重组质粒构建成功；Western blot检测结果表明，序列为3U和OR的慢病毒收集液侵染的细胞内TFEB表达量均降低。结论：利用序列为3U和OR的shRNA构建的重组质粒、包装的慢病毒均成功，干扰了侵染获得的细胞系中TFEB的表达。
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