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目的人婆罗双树样基因4(spalt-like transcription factor 4,SALL4)是近年来新发现的癌基因,具有促进肿瘤生长和转移的作用。本研究旨在构建可诱导shRNA基因干扰SALL4慢病毒载体并转染胃癌细胞建立稳定细胞株,探讨SALL4基因沉默对胃癌细胞转移潜能的影响。方法合成特异性靶向人SALL4基因的shRNA序列,连接入TetpLKO-puro慢病毒载体;脂质体法介导重组慢病毒质粒系统转染293T细胞,包装产生慢病毒;收集病毒上清,转染人胃癌细胞株MGC80-3,嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,采用四环素(tetracycline,Tet)诱导shRNA表达。同时设立shRNA对照组。荧光定量RT-PCR检测SALL4mRNA水平;蛋白质印迹检测SALL4蛋白水平;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹分别检测干性指标Oct4和上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)指标E-cadherin、Slug和Twist基因及蛋白表达水平。结果 PCR结果表明,SALL4shRNA序列已成功连入Tet-pLKO-puro慢病毒载体。荧光定量RT-PCR结果表明,对照组Tet-PLKO-shCtrl细胞在Tet诱导前后,SALL4mRNA水平分别为1.015±0.150和0.932±0.127,P=0.580;实验组Tet-PLKO-shSALL4细胞在Tet诱导前后,SALL4mRNA水平分别为1.000±0.028和0.443±0.017,P<0.001。蛋白质印迹结果显示,SALL4蛋白与mRNA变化一致。Transwell迁移实验显示,对照组Tet-PLKO-shCtrl细胞Tet诱导前后,迁移细胞数分别为(327±66)和(330±50)个,P=0.856;Tet-PLKO-shSALL4细胞Tet诱导前后,迁移细胞数分别为(335±44)和(100±23)个,P<0.001。荧光定量RT-PCR检测结果表明,Tet-PLKO-shSALL4细胞Tet诱导后,干性指标Oct4及EMT指标Slug和Twist mRNA水平分别为0.140±0.003、0.532±0.047和0.652±0.033,P值分别为<0.001、0.008和0.035;E-cadherin mRNA水平增加至8.994±0.689,P<0.001。对照组经Tet诱导,Oct4、Slug、Twist和E-cadherin基因表达水平分别为1.180±0.010、0.931±0.016、0.978±0.036和1.330±0.371,P值分别为0.063、0.086、0.646和0.300。蛋白质印迹与荧光定量RT-PCR结果一致。结论成功构建可诱导shRNA基因干扰SALL4慢病毒载体,并建立稳定转染胃癌细胞株。Tet诱导SALL4shRNA表达可显著下调SALL4基因表达水平和抑制胃癌细胞MGC80-3的迁移能力。