【摘 要】
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目的探讨将叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)选择渗透性与PCR技术相结合(EMA-PCR),建立有效快速检测铜绿假单胞菌活菌的方法。方法以铜绿假单胞菌oprI基因为PCR检
【机 构】
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江苏省昆山市疾病预防控制中心; 四川大学华西公共卫生学院; 江苏省苏州市疾病预防控制中心;
【基金项目】
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苏州市饮用水安全与水性疾病监测公共服务平台2012年开放课题(No.SZPT2012002)资助
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目的探讨将叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)选择渗透性与PCR技术相结合(EMA-PCR),建立有效快速检测铜绿假单胞菌活菌的方法。方法以铜绿假单胞菌oprI基因为PCR检测靶基因,纯培养物提取模板进行PCR,检测PCR灵敏度、EMA使用浓度和曝光时间优化试验。结果 PCR检测灵敏度为3×103 CFU/mL;曝光处理时间为10 min;EMA浓度≤5μg/mL对活菌DNA扩增没有明显抑制,终浓度为1μg/mL EMA能有效抑制3×106 CFU/mL死菌扩增;1%活菌混合体系检测结果阳性。结论 EMA-PCR方法能有效快速检测铜绿假单胞菌活菌,能避免PCR检测可能造成的假阳性结果。
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