哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在细胞的生长中发挥重要作用，其在人晶状体上皮细胞（HLECs）中的过度表达与白内障术后的并发症，如后发性白内障有关，将mTOR短发夹状RNA（shRNA）质粒成功转染至HLECs可为寻找预防和治疗后发性白内障的靶点提供实验支持。
目的探讨HLECs中mTOR基因沉默后对细胞形态和功能的影响。
方法分别将mTOR shRNA质粒、空白质粒和PBS加入细胞培养液感染293T细胞以进行慢病毒包装。常规培养HLECs，然后分别用各组包装成功的慢病毒感染HLECs 72 h，分为mTOR shRNA转染1、2、3，组空白质粒组和PBS组。利用Western blot法检测并比较不同组间HLECs中mTOR蛋白的表达以确定mTOR被沉默，从mTOR shRNA转染1、2、3组中筛选出沉默效率最高组进行后续实验。采用流式细胞仪检测G1期HLECs细胞比例；采用Western blot法检测细胞中上皮和间质标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-Cadherin蛋白的表达；采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组细胞的增生能力。
结果mTOR shRNA转染1、2、3组293T细胞上清液中含有大量包装成功的慢病毒，对绿色荧光蛋白（GFP）呈阳性反应，而空白质粒组和PBS组未见GFP反应的绿色荧光。mTOR shRNA转染1、2、3组及空白质粒组转染的质粒具有嘌呤抗性，转染后的HLECs均生长良好，mTOR shRNA转染1、2、3组80%以上的细胞对GFP呈阳性反应，PBS组细胞无嘌呤抗性，可见较多细胞死亡。Western blot法检测显示mTOR shRNA转染3组mTOR mRNA表达最弱，用于后续实验。mTOR shRNA转染3组α-SMA表达条带明显弱于空白质粒组和PBS组，而E-Cadherin表达明显强于空白质粒组和PBS组。CCK8法检测证实，实验后1h、2h3个组间细胞增生值（A值）的总体差异比较均有统计学意义，其中mTOR shRNA转染3组的细胞增生值均明显低于空白质粒组和PBS组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。流式细胞仪检测表明，mTOR shRNA转染3组细胞周期阻滞于G1期的细胞比例约为（60.00±1.78）%，明显高于空白质粒组的（53.48±1.86）%和PBS组的（53.02±1.49）%，总体比较差异有统计学意义（F=18.910，P=0.002）。
结论mTOR shRNA转染HLECs后可使mTOR基因沉默，从而逆转HLECs中上皮-间质转化（EMT）的进程，抑制细胞增生，延长细胞周期。