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【摘要】 目的：检测KISS-1在结肠癌中的蛋白表达，探讨其临床病理学意义。方法：应用免疫组化SP法检测51例结肠癌及19例正常肠黏膜中KISS-1蛋白的表达，分析其与结肠癌的发生、发展及浸润、转移的关系。结果：KISS-1蛋白在正常肠黏膜中的表达高于癌组织，差异有统计学意义(P＜0.05)；KISS-1蛋白表达与结肠癌浸润深度及淋巴结转移密切相关(P＜0.05)，和分化无关(P＞0.05)。结论：KISS-1的低表达与结肠癌的发生、发展及浸润、转移密切相关。
【关键词】 结肠癌；KISS-1；发生；浸润；转移
结肠癌是常见危害较大消化道恶性肿瘤之一，患者早期症状易被忽视，病死率高。研究表明结肠癌的生物学行为与某些分子指标有关。笔者运用免疫组化SP法检测了结肠癌组织中肿瘤转移抑制基因KISS-1的蛋白表达，探讨其在结肠癌的发生、浸润、转移中的作用。
1 材料与方法
1.1 材料 选取漯河医学高等专科学校第三附属医院病理科2005年1月至2010年12月存档结肠癌蜡块51例，其中男37例，女14例，年龄32~75岁。51例结肠癌标本中，高分化23例，中低分化28例；有淋巴结转移25例，无淋巴结转移转26例；癌组织侵及浅肌层组16例，侵及深肌层17例，侵及外膜18例。选取远离肿块的手术残端19例为正常对照组。所有患者术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗。51例均为肠腺癌，全部标本均经40g/L福尔马林固定，石蜡包埋，4 ?m厚连续切片备用。
1.2 主要试剂与方法 羊抗人KISS-1单克隆抗体购自美国DAKO公司。采用SP法，KISS-1一抗浓度1：200，DAB显色，苏木素复染。染色步骤严格按说明书进行。免疫组化结果判定：KISS-1和MMP-9免疫组化染色阳性信号定位于胞质，呈棕黄色颗粒，显色强时为棕褐色。参照文献[1]，根据染色程度及免疫阳性细胞占肿瘤细胞总数百分比综合计分。
1.3 统计学处理 所有数据均采用SPSS17.0进行统计学处理。不同结肠癌组织中KISS-1蛋白阳性率的比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。
2 结果
正常结肠黏膜及不同病理特征结肠癌组织中KISS-1蛋白表达见表1。
表1 结肠粘膜及结肠癌组织中KISS-1蛋白的表达
3 讨论
KiSS-1基因定位于1号染色体，该基因的初始编码产物是一个由145个氨基酸残基组成的肽链。1996年Lee等在人黑色素瘤细胞中分离出KiSS-1基因，然后将其转染到人类乳腺癌细胞株上，发现该基因能显著抑制肿瘤细胞的转移。后来学者研究也表明KiSS-1基因与多种肿瘤的浸润转移密切相关。王洪兴[2]等从36例胃癌组织中提取KISS-1 mRNA，结果显示在胃癌组织中KISS-1 mRNA明显低于正常胃粘膜组织，且有淋巴结转移组的表达低于无转移组。郭通[3]等也能过免疫组化染色发现90例乳腺癌组织中，有淋巴结转移的37例癌组织中KISS-1的表达明显低于无转移的53例癌组织。
本实验结果显示KISS-1蛋白在结肠癌组织中的表达低于正常胃黏膜；在侵及浅肌层、深肌层和外膜层结肠癌组织中，KISS-1蛋白阳性表达率依次降低；有淋巴结转移结肠癌组织中的阳性表达比无淋巴结转移组明显降低；组间比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。表明KISS-1表达缺失或下调在结肠癌的发生发展、浸润转移过程中发挥着重要作用，可能是KISS-1通过信号传导通路促使细胞内第二信使DAG和 IP3产生增多，增加细胞内钙离子水平，进而抑制肿瘤细胞的增生、诱导肿瘤细胞分化和凋亡[4]；同时，KISS-1主要是通过调节细胞质内抑制性蛋白IκBα降解胞质中p65 /p50 NF-κB蛋白，使其与基质金属蛋白酶启动子的结合降低，进而减少基质金属蛋白酶的合成，导致细胞外基质降解减少、肿瘤细胞粘附能力增强及移行能力下降，进而抑制肿瘤细胞的机动性、趋化性和侵袭性[5]。
本研究提示联合检测KISS-1在结肠癌组织中的表达，有助于结肠癌的早期诊断及对结肠癌浸润转移潜能的判断，对结肠癌的临床治疗有一定的指导意义。
参考文献
[1]张延新,刘喜民，陈奎生,等. KISS-1与MMP-9蛋白在胃癌中的表达及临床病理意义[J].郑州大学学报（医学版）,2010,45(3):384-387.
[2]王洪兴,秦川,张贵虎,等. 胃癌组织中KISS－1和MMP－9的表达及其意义[J].山东医药,2010,50(24):19-10.
[3]郭通,庞达. KiSS -1、TIMP-1在乳腺癌中的表达及在淋巴结转移中的意义 [J].齐齐哈尔医学院学报,2010,31(7):1012－1014.
[4] Kotani M, Detheux M, Vandenbogaerde A, et al. The metastasis suppressor gene KISS-1 encodes kisspeptins, the natural ligands of the orphan G protein-coupled receptor GPR54[J]. J Biol Chem, 2001,276(37):34 631
[5] Hori A, Honda S, Asada M, et al. Metastin suppresses the motility and growth of CHO cells transfected with its receptor[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2001,286(5):958
【关键词】 结肠癌；KISS-1；发生；浸润；转移
结肠癌是常见危害较大消化道恶性肿瘤之一，患者早期症状易被忽视，病死率高。研究表明结肠癌的生物学行为与某些分子指标有关。笔者运用免疫组化SP法检测了结肠癌组织中肿瘤转移抑制基因KISS-1的蛋白表达，探讨其在结肠癌的发生、浸润、转移中的作用。
1 材料与方法
1.1 材料 选取漯河医学高等专科学校第三附属医院病理科2005年1月至2010年12月存档结肠癌蜡块51例，其中男37例，女14例，年龄32~75岁。51例结肠癌标本中，高分化23例，中低分化28例；有淋巴结转移25例，无淋巴结转移转26例；癌组织侵及浅肌层组16例，侵及深肌层17例，侵及外膜18例。选取远离肿块的手术残端19例为正常对照组。所有患者术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗。51例均为肠腺癌，全部标本均经40g/L福尔马林固定，石蜡包埋，4 ?m厚连续切片备用。
1.2 主要试剂与方法 羊抗人KISS-1单克隆抗体购自美国DAKO公司。采用SP法，KISS-1一抗浓度1：200，DAB显色，苏木素复染。染色步骤严格按说明书进行。免疫组化结果判定：KISS-1和MMP-9免疫组化染色阳性信号定位于胞质，呈棕黄色颗粒，显色强时为棕褐色。参照文献[1]，根据染色程度及免疫阳性细胞占肿瘤细胞总数百分比综合计分。
1.3 统计学处理 所有数据均采用SPSS17.0进行统计学处理。不同结肠癌组织中KISS-1蛋白阳性率的比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。
2 结果
正常结肠黏膜及不同病理特征结肠癌组织中KISS-1蛋白表达见表1。
表1 结肠粘膜及结肠癌组织中KISS-1蛋白的表达
3 讨论
KiSS-1基因定位于1号染色体，该基因的初始编码产物是一个由145个氨基酸残基组成的肽链。1996年Lee等在人黑色素瘤细胞中分离出KiSS-1基因，然后将其转染到人类乳腺癌细胞株上，发现该基因能显著抑制肿瘤细胞的转移。后来学者研究也表明KiSS-1基因与多种肿瘤的浸润转移密切相关。王洪兴[2]等从36例胃癌组织中提取KISS-1 mRNA，结果显示在胃癌组织中KISS-1 mRNA明显低于正常胃粘膜组织，且有淋巴结转移组的表达低于无转移组。郭通[3]等也能过免疫组化染色发现90例乳腺癌组织中，有淋巴结转移的37例癌组织中KISS-1的表达明显低于无转移的53例癌组织。
本实验结果显示KISS-1蛋白在结肠癌组织中的表达低于正常胃黏膜；在侵及浅肌层、深肌层和外膜层结肠癌组织中，KISS-1蛋白阳性表达率依次降低；有淋巴结转移结肠癌组织中的阳性表达比无淋巴结转移组明显降低；组间比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。表明KISS-1表达缺失或下调在结肠癌的发生发展、浸润转移过程中发挥着重要作用，可能是KISS-1通过信号传导通路促使细胞内第二信使DAG和 IP3产生增多，增加细胞内钙离子水平，进而抑制肿瘤细胞的增生、诱导肿瘤细胞分化和凋亡[4]；同时，KISS-1主要是通过调节细胞质内抑制性蛋白IκBα降解胞质中p65 /p50 NF-κB蛋白，使其与基质金属蛋白酶启动子的结合降低，进而减少基质金属蛋白酶的合成，导致细胞外基质降解减少、肿瘤细胞粘附能力增强及移行能力下降，进而抑制肿瘤细胞的机动性、趋化性和侵袭性[5]。
本研究提示联合检测KISS-1在结肠癌组织中的表达，有助于结肠癌的早期诊断及对结肠癌浸润转移潜能的判断，对结肠癌的临床治疗有一定的指导意义。
参考文献
[1]张延新,刘喜民，陈奎生,等. KISS-1与MMP-9蛋白在胃癌中的表达及临床病理意义[J].郑州大学学报（医学版）,2010,45(3):384-387.
[2]王洪兴,秦川,张贵虎,等. 胃癌组织中KISS－1和MMP－9的表达及其意义[J].山东医药,2010,50(24):19-10.
[3]郭通,庞达. KiSS -1、TIMP-1在乳腺癌中的表达及在淋巴结转移中的意义 [J].齐齐哈尔医学院学报,2010,31(7):1012－1014.
[4] Kotani M, Detheux M, Vandenbogaerde A, et al. The metastasis suppressor gene KISS-1 encodes kisspeptins, the natural ligands of the orphan G protein-coupled receptor GPR54[J]. J Biol Chem, 2001,276(37):34 631
[5] Hori A, Honda S, Asada M, et al. Metastin suppresses the motility and growth of CHO cells transfected with its receptor[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2001,286(5):958