核酸适配体应用于乳制品中抗生素残留比色检测研究

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抗生素的发现曾经挽救了无数人的生命,但在现今社会,抗生素的滥用却令人触目惊心。从畜牧养殖到医疗、食品,滥用抗生素的现象无所不在,我国已成为抗生素滥用的重灾区,滥用抗生素会导致多重耐药性的产生与内毒素的释放以及畜禽体内的残留,不仅直接影响动物产品的安全与卫生、畜牧业的生产与经济,而且极大的威胁着人类的身体健康与生存环境。因此,建立快速有效的方法,实现对动物制品中抗生素的有效检测具有重大意义。核酸适配体主要利用SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,指数富集的配体系统进化)技术获得,其具有靶标广泛、特异性好、亲和力高等优点。本论文基于核酸适配体技术,通过其对纳米金和氯化血红素催化氧化特性的调控,建立了几种快速、灵敏度高、特异性高的比色检测抗生素的新方法,为乳制品中抗生素的检测提供了新思路。本文主要工作如下:(1)建立了基于核酸适配体技术可调控催化活性的纳米金比色检测链霉素的方法。加入链霉素前后的检测体系使用透射电子显微镜(TEM)进行了表征。为了提升检测体系的灵敏度,本文还对当前检测体系中的几个关键参数如:pH、底物及适配体浓度、纳米金的种类与用量、孵育及反应的温度等进行了探究。在最优条件下,该方法的动态检测范围为0.1μM~0.5μM,最低检测限为86 nM。特异性实验证实其它常见抗生素对链霉素的检测无明显干扰,在实际牛奶样品中对链霉素检测的加标回收率为90.8%~98.9%。(2)建立了基于核酸适配体技术增强的氯化血红素(Hemin)过氧化物酶活性比色检测四环素的方法。为了提升检测体系的灵敏度,本文还对当前检测体系中的几个关键参数如:pH、适配体Quadruplex和Hemin及底物的浓度等进行了探究。在最优条件下,该方法的动态检测范围为10~1000μM,最低检测限为3.3 nM。特异性实验证实其它常见抗生素对四环素的检测无明显干扰,在实际牛奶样品中对四环素检测的加标回收率为94%~99%。综上所述,本论文基于核酸适配体技术,以AuNPs和Hemin为传感信号输出载体,建立了一些灵敏快速、特异性强、肉眼可辨的比色检测抗生素的新方法。本论文建立这些方法简单可靠,不需要复杂的分子修饰及昂贵的仪器,有望应用于实际样品中抗生素的检测。此外,本论文建立的方法还具有广泛适用性,能够通过置换所用的适配体,应用于其他生物环境物质的检测。
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