【摘 要】
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目的研究羟氯喹与贝伐单抗协同抑制HUVEC细胞生长的作用及机制。方法利用RTCA实验、流式凋亡检测、Matrigel血管状结构形成实验,分别研究羟氯喹与贝伐单抗联用对HUVEC细胞增
【机 构】
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浙江省人民医院杭州医学院附属人民医院药学部;
【基金项目】
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浙江省自然科学基金资助项目(No LY16H310009);浙江省医药卫生科技计划项目一般项目(No 2016KYA028,2015RCB002)
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目的研究羟氯喹与贝伐单抗协同抑制HUVEC细胞生长的作用及机制。方法利用RTCA实验、流式凋亡检测、Matrigel血管状结构形成实验,分别研究羟氯喹与贝伐单抗联用对HUVEC细胞增殖、凋亡及体外血管状结果形成的影响;Western blot检测LC3、p62蛋白的表达;mCherry-EGFP-LC3双荧光标记观察自噬流,电镜观察自噬体和线粒体变化,以及利用转录组测序(RNA-seq)揭示羟氯喹与贝伐单抗联用的调控分子机制。结果与单药组相比,羟氯喹和贝伐单抗联合能够协同抑制HUVEC细胞增殖,促进HUVEC细胞凋亡,抑制HUVEC细胞血管状结构形成;羟氯喹能够抑制HUVEC细胞自噬;转录组测序结果显示,羟氯喹与贝伐单抗联用影响69个差异表达基因,可能主要通过调控RICTOR、PIK3CA等"hub"基因,发挥协同抑制HUVEC细胞的作用。结论羟氯喹和贝伐单抗联用协同抑制HUVEC细胞,其机制不仅与羟氯喹抑制细胞自噬有关,而且与RICTOR、PIK3CA等"hub"基因调控相关。
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