【摘 要】
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首先将来源于Caldicellulosiruptor saccharolyticus的纤维二糖差向异构酶基因CsCEm进行密码子优化,然后进行全基因合成,再将其引入到载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-Cs CE
【机 构】
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江南大学食品学院,江南大学食品科学与技术国家重点实验室
【基金项目】
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十二五国家科技支撑计划项目(编号:2011BAD23B03);国家自然科学基金面上项目重点项目(编号:31230057)
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首先将来源于Caldicellulosiruptor saccharolyticus的纤维二糖差向异构酶基因CsCEm进行密码子优化,然后进行全基因合成,再将其引入到载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-Cs CEm并转化入毕赤酵母GS115,得到酵母工程菌株。经微孔板筛选、摇瓶筛选得到酶活最高的重组工程菌GS115-4-19。该菌株经甲醇诱导144 h后,摇瓶发酵液上清酶活达到0.42 U/m L。酶学性质研究结果表明:该酶的最适pH为7.5,且在pH 6.0~8.0范围内相对酶活都在80%以上;在pH 4~9的缓冲液中放置24 h后仍保持原酶活力的80%以上;最适温度为80℃,在60℃~80℃保温30 min后,相对酶活在80%以上。动力学研究结果表明该酶对底物乳糖的Km和Vmax分别为(120.27±9.96)mmol/L和(1.035±0.05)mmol/L/min。纤维二糖差向异构酶在毕赤酵母中的成功表达为生物酶法合成乳果糖提供了重要参考。
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