【摘 要】
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目的:采用套式PCR克隆经同种异型抗原激活后的人细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表达的颗粒溶素(Granulysin,GLS)Mr 15000与Mr 9000活性片段的编码序列并进行序列测定与分析,为进一步
【机 构】
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重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室
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目的:采用套式PCR克隆经同种异型抗原激活后的人细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表达的颗粒溶素(Granulysin,GLS)Mr 15000与Mr 9000活性片段的编码序列并进行序列测定与分析,为进一步表达纯化该活性片段和研究GLS的免疫杀伤机制奠定基础.方法:抽提经过培养并激活的健康人CTL淋巴细胞总RNA,经逆转录后以套式PCR方法扩增出GLS的Mr15000与Mr 9000活性片段的编码序列,插入pET32a(+)载体,转化大肠杆菌TOP10,阳性克隆经PCR及酶切鉴定后进行测序分析.结果:成功扩增出了包含GLSMr15000与Mr9000活性片段完整编码序列的cDNA,与预期大小相同,PCR、酶切及测序鉴定证明得到了读码框正确的pET32a-Mr 15000与pET32a-Mr 9000重组子.序列分析表明GLS基因编码产物在第119位存在氨基酸多态性.结论:人天然颗粒溶素Mr 15000与Mr 9000活性片段编码序列能够通过以上方法获得和克隆并用于后续研究.
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