【摘 要】
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以盐酸可乐定(Clonidine hydrochloride,CLO)的衍生物盐酸阿可乐定(Apraclonidine hydrochloride, ACLO)为半抗原,采用重氮化法合成人工抗原,免疫小鼠制备高敏感性、特异性的 CLO 鼠源多抗并进行鉴定,为CLO单克隆抗体的制备奠定基础.将 ACLO分别与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联,合成免疫原CLO-BSA和包被原CLO-OVA,经紫外扫描和 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定
【机 构】
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河南科技大学 食品与生物工程学院,河南洛阳 471003;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,郑州 450002;西北农林科技大学 动物医学院,陕西杨凌 712100;中国检验检疫科学研究院,北京
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以盐酸可乐定(Clonidine hydrochloride,CLO)的衍生物盐酸阿可乐定(Apraclonidine hydrochloride, ACLO)为半抗原,采用重氮化法合成人工抗原,免疫小鼠制备高敏感性、特异性的 CLO 鼠源多抗并进行鉴定,为CLO单克隆抗体的制备奠定基础.将 ACLO分别与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联,合成免疫原CLO-BSA和包被原CLO-OVA,经紫外扫描和 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定偶联效果后,免疫BALB/c小鼠,并对获得的鼠源多抗采用间接 ELISA和间接竞争 ELISA鉴定其特性.结果显示,免疫的4只小鼠血清抗体效价均达到 1∶25 600以上,其中 2 号小鼠的抗体敏感性最高,半数抑制质量浓度(IC50 )为 7.026 ng/mL,与其他几种常见瘦肉精类药物的交叉反应率均小于0.1%,特异性良好.表明成功合成免疫原性良好的CLO人工抗原,并获得敏感性高、特异性强的CLO鼠源多抗,为其单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立奠定良好基础.
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