实时荧光定量PCR检测人APRILmRNA的标准品构建

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目的:构建增殖诱导配体(APRIL)基因的重组质粒的标准品。方法:从肺癌的组织标本中抽提总RNA逆转录合成cDNA,以cDNA为模板扩增目的片段,从胶中回收目的片段,再将回收的目的片段与pGEM—T Easv载体连接并转化宿主菌DH-5α,分别用菌落PCR及测序两种方法证实目的片段已成功转染细菌。抽提重组质粒DNA用核酸分析仪测浓度后换算成copies/ml。结果:成功构建了APRIL实时荧光定量标准品的线性范围10^5~10^12copies/ml,批内与批间CV分别为1.34%~3.07%和7.24%
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