观察烧伤脓毒症小鼠伤后早期外周血T淋巴细胞中膜联蛋白A1(ANXA1)、GATA－3、T－bet的表达情况，分析3种标志物的免疫调控机制。
方法将780只清洁级雄性小鼠按随机数字表法分为假伤组60只、烧伤组240只、脓毒症组240只及烧伤脓毒症组240只。假伤组小鼠背部于37 ℃温水中浸浴10 s模拟致伤；烧伤组小鼠背部于100 ℃沸水中浸浴10 s造成20%TBSA深Ⅱ度烧伤；脓毒症组小鼠腹腔注射LPS(6 mg/kg)；烧伤脓毒症组小鼠同烧伤组处理后，立即同脓毒症组腹腔注射等剂量LPS。(1)伤后即刻，假伤组按照随机数字表法选取6只小鼠，每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液。其余3组按照随机数字表法，于伤后12、24、48及72 h各选取6只小鼠，每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液。每管细胞悬液等分为2份，一份加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的人抗小鼠CD4单克隆抗体、藻红蛋白(PE)标记的人抗小鼠γ干扰素单克隆抗体，以标记Th1；另一份加入FITC标记的人抗小鼠CD4单克隆抗体、PE标记的人抗小鼠IL－4单克隆抗体，以标记Th2。采用流式细胞仪检测Th1、Th2百分比，并计算Th1/Th2比值。(2)伤后即刻，假伤组按照随机数字表法取18只小鼠，每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液。其余3组按照随机数字表法，于伤后12、24、48及72 h各选取18只小鼠，每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液。采用实时荧光定量RT－PCR法检测淋巴细胞中ANXA1、GATA－3、T－bet mRNA的表达量。(3)伤后即刻，假伤组按照随机数字表法取36只小鼠，每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液，分成6次进行实验。一次取6管细胞悬液分别加入6种抗体组合：标记Th1和Th2的抗体分别与PE－花青素7标记的人抗小鼠ANXA1单克隆抗体、PE－花青素7标记的人抗小鼠GATA－3单克隆抗体、PE－花青素7标记的人抗小鼠T－bet单克隆抗体联用，以分别标记Th1、Th2的3种标志物。其余3组按照随机数字表法，于伤后12、24、48及72 h各取36只小鼠，每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液，各时相点分成6次进行实验。一次取6管细胞悬液分别加入上述6种抗体组合进行标记。采用流式细胞仪检测Th1、Th2中ANXA1、GATA－3、T－bet 3种标志物的阳性细胞百分比。对数据行单因素方差分析、析因设计方差分析、SNK检验。对淋巴细胞中的ANXA1 mRNA与GATA－3 mRNA表达量及Th1、Th2中ANXA1阳性细胞百分比与GATA－3阳性细胞百分比均行直线相关分析。
结果(1)与假伤组伤后即刻比较，烧伤组小鼠淋巴细胞中Th1、Th2百分比及Th1/Th2比值从伤后24 h起明显降低(P值均小于0.05)，脓毒症组及烧伤脓毒症组小鼠淋巴细胞中Th1、Th2百分比及Th1/Th2比值从伤后12 h起明显降低(P值均小于0.05)。(2)与假伤组伤后即刻比较，烧伤组小鼠淋巴细胞中ANXA1和GATA－3 mRNA表达量从伤后24 h起明显下降(P值均小于0.05)；T－bet mRNA表达量于伤后24 h明显下降，但伤后48、72 h明显升高，P值均小于0.05。与假伤组伤后即刻比较，脓毒症组小鼠淋巴细胞中ANXA1和GATA－3 mRNA表达量从伤后12 h起明显降低，T－bet mRNA表达量从伤后12 h起明显增加，P值均小于0.05；烧伤脓毒症组小鼠淋巴细胞中ANXA1、GATA－3、T－bet mRNA表达量从伤后12 h起明显降低(P值均小于0.05)，于伤后72 h达最低值(分别为0.50±0.04、0.45±0.03、0.21±0.05)。(3)淋巴细胞中ANXA1 mRNA表达量与GATA－3 mRNA表达量呈明显正相关(r＝0.862，P<0.05)。(4)与假伤组伤后即刻比较，烧伤组小鼠Th1、Th2中ANXA1、GATA－3阳性细胞百分比从伤后24 h起均明显降低，T－bet阳性细胞百分比于伤后24 h明显降低，但从伤后48 h起明显升高，P值均小于0.05。脓毒症组小鼠Th1和Th2中ANXA1、GATA－3阳性细胞百分比从伤后12 h起持续下调，大部分时相点显著低于假伤组伤后即刻(P值均小于0.05)；T－bet阳性细胞百分比从伤后12 h起明显高于假伤组伤后即刻(P值均小于0.05)。烧伤脓毒症组小鼠Th1和Th2中ANXA1、GATA－3、T－bet 3种标志物的阳性细胞百分比从伤后12 h起持续下调，大部分时相点显著低于假伤组伤后即刻(P值均小于0.05)。(5)在Th1、Th2中，GATA－3阳性细胞百分比与ANXA1阳性细胞百分比均呈明显正相关(r值分别为0.747、0.787, P值均小于0.05)。
结论在烧伤脓毒症小鼠中，ANXA1、GATA－3及T－bet表达持续下调，在Th1/Th2平衡向Th2方向漂移及免疫抑制过程中发挥重要作用。