【摘 要】
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目的 :通过RNA干扰技术使v-raf鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1(v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1,BRAF)的突变基因BRAFV600E表达沉默,探讨该基因沉默在
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目的 :通过RNA干扰技术使v-raf鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1(v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1,BRAF)的突变基因BRAFV600E表达沉默,探讨该基因沉默在甲状腺乳头状癌细胞体外增殖中的作用。方法:将携带靶向BRAFV600E基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)的质粒载体(命名为BRAFV600E-sh RNA)转染甲状腺乳头状癌CGTHW3细胞株,然后采用半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测BRAFV600E-sh RNA转染对BRAFV600E突变基因表达的抑制作用,以及丝裂原细胞外激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen extracellular kinase/extracellular signal-regulated kinase,MEK/ERK)信号通路相关蛋白表达水平的变化;采用MTT法检测BRAFV600E突变基因沉默后甲状腺乳头状癌细胞体外增殖能力的变化;采用FCM法检测细胞周期分布的变化。结果 :特异性BRAFV600E-sh RNA转染可明显抑制甲状腺乳头状癌细胞中BRAFV600E突变基因的m RNA和蛋白表达,且使MEK/ERK信号通路中Ras、磷酸化MEK(phospho-MEK,p-MEK)和p-ERK蛋白的表达量明显减少(P值均<0.05)。与未转染的空白对照组相比,BRAFV600E-sh RNA转染后72 h时CGTHW3细胞的增殖活性明显降低(P<0.05);转染组中G0/G1期细胞所占比例明显高于空白对照组,而S期细胞所占比例明显降低(P值均<0.05)。结论 :BRAFV600E突变基因沉默可能通过阻断MEK/ERK信号通路,有效抑制甲状腺乳头状癌细胞的体外增殖。
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