【摘 要】
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目的:叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)具有特异性抑制死菌DNAPCR扩增而对活菌细胞无影响的特点,将其应用于鸡肉中鼠伤寒沙门氏菌活菌检测。方法:待测样品中加入E
【基金项目】
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“十二五”国家科技支撑计划项目(2012BAD28B03);现代农业产业技术体系专项(CARS-42);国家自然科学基金项目(31000799)
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目的:叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)具有特异性抑制死菌DNAPCR扩增而对活菌细胞无影响的特点,将其应用于鸡肉中鼠伤寒沙门氏菌活菌检测。方法:待测样品中加入EMA至终质量浓度为50μg/m L,卤素灯曝光处理10 min,提取DNA进行RT-PCR反应,根据Ct值和标准曲线计算样品中活菌的数量。结果:相同细胞浓度条件下,活菌经EMA处理后其Ct值与未经EMA处理组的Ct值无显著性差异(P>0.05),且细胞浓度与Ct值均呈显著负相关性,相关系数分别是0.9916和0.9832;死菌经EMA处理后其Ct值与活菌经EMA处理后的Ct值有显著性差异(P﹤0.05),而与阴性对照组无显著性差异(P>0.05);死/活鼠伤寒沙门氏菌混合菌液污染鸡肉样品检测结果显示,与直接RT-PCR方法相比,EMART-PCR方法的检测结果更接近于平板计数结果。结论:EMA与RT-PCR相结合的方法可以快速、准确地检测鸡肉中鼠伤寒沙门氏菌活菌的数量,避免假阳性结果,具有实用意义。
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