探讨dsP21-555转染对肾透明细胞癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的影响。
方法肾透明细胞癌细胞分别使用脂质体Lipofectamine 3000转染dsControl和dsP21-555。荧光实时定量PCR(RT-qPCR)及Western blotting分别检测分析p21 mRNA及蛋白的表达情况。流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布，使用细胞活力实验(MTS法)和集落培养实验分析细胞活力和增殖能力。
结果在ACHN和786-O细胞株中，dsP21-555组p21 mRNA的表达(2.86±0.33、1.96±0.35)相比dsControl组(1.05±0.34、1.01±0.14)，分别升高至2.72倍(t＝7.640，P<0.001)和1.95倍(t＝5.058，P＝0.002)。Western blotting实验证明两种细胞株中P21蛋白表达水平的上升与p21 mRNA上调相一致。FCM结果显示，转染dsP21-555后，细胞周期被阻滞在G0-G1期(57.08%±5.66%∶46.06%±4.60%，t＝3.023，P＝0.023；61.58%±6.23%∶42.25±6.08%，t＝4.444，P＝0.004)。MTS结果显示，转染dsP21-555后两种细胞的活力较dsControl组明显下降，其吸光度分别为0.85±0.20∶1.27±0.13，t＝3.410，P＝0.014；1.04±0.25∶1.55±0.10，t＝3.758，P＝0.009。集落培养实验显示，两细胞株dsControl组形成的集落数分别为110.91±26.21、129.89±22.87，dsP21-555组形成的集落数分别为59.37±14.23(t＝3.456，P＝0.014)、71.26±21.38(t＝3.745，P＝0.010)，表明dsP21-555组细胞增殖能力明显降低。
结论dsP21-555可明显上调肾透明细胞癌细胞中p21基因的表达，并显著抑制癌细胞的生长，提示dsP21-555可能成为一种新型的基因治疗工具。