真核表达载体pEGFP-N1-ZIP10的构建及其对人乳腺癌细胞中其他锌转运体基因表达的影响

来源 :山东大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:xy3594830691
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目的 构建pEGFP-N1-ZIP10表达载体,观察其在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中的表达,并检测ZIP10过表达对其他锌转运体的影响.方法 从外周血经RT-PCR扩增ZIP10 cDNA序列,并将其定向克隆至真核表达质粒pEGFP-N1中,pEGFP-N1-ZIP10经酶切及测序鉴定后,转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,RT-PCR检测ZIP10的表达及其他锌转运体ZnT1、ZIP1、ZIP6等表达的变化.结果 酶切和测序证实目的 基因片段大小、方向均正确,转染MCF-7和MDA-MB-231细胞,RT-PCR检测到ZIP10在mRNA水平过表达,并发现使ZIP1的表达显著降低.结论 成功构建真核表达栽体pEGFP-N1-ZIP10,并在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞瞬时表达成功,转染后使细胞中ZIP1的表达明显降低,为进一步研究ZIP10在乳腺癌发生发展中的作用奠定基础.
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