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摘要： 奶制品安全问题一直以来都是人民健康和国计民生的重大问题，关系到人民群众的切身利益，奶牛乳房炎造成的损失很大，其由环境，饲养管理等因素引起，药浴液用于预防奶牛乳房炎是很有意义的。本文以复合亚氯酸钠泡腾片、成膜基质和保护剂分别作为原料，针对奶牛乳房炎，制备了奶牛用乳头药浴液，并通过实验对该药浴液进行评价。
关键词：奶牛乳头，药浴液，性能，评价
奶制品安全问题一直以来都是人民健康和国计民生的重大问题，关系到人民群众的切身利益，奶牛乳房炎造成的损失很大[1]。其由环境，饲养管理等因素引起[2，3]，市面上的药浴液在效果，运输，残留等方面存在问题[4]，所以研制一种安全、高效、绿色、廉价的药浴液用于预防奶牛乳房炎是很有意义的。
本文介绍一种奶牛用乳头药浴液，运用二氧化氯具有的安全、高效杀菌原理，可以有效、快速的对奶牛乳头部位进行消毒杀菌，同时成膜基质能在乳头表面形成薄膜，保护皮肤，保护剂可以对破损、伤患处进行抗炎、镇痛，与二氧化氯共同达到抑菌的效果。该药浴液主要由复合亚氯酸钠泡腾片（主要成分为亚氯酸钠）、成膜基质（主要成分为改性海藻酸钠）、保护剂（主要成分为镇痛抑菌剂）组成，使用时现场配置，药浴液中二氧化氯含量约为45～50mg/L。
一、实验部分
1.试剂与仪器
（1）主要原料
复合亚氯酸钠泡腾片、成膜基质、保护剂。
（2）仪器
电子精密天平：量程0～200g，感量1mg;片剂硬度测试仪;脆碎度测试仪;精密酸度计;低速台式离心机;紫外分光光度计;立式压力蒸汽灭菌器;电热恒温水浴锅;水浴恒温振荡器.
2.药浴剂的制备
取1片复合亚氯酸钠泡腾片在在含有50 mL水的密闭容器中活化10 min，然后稀释10倍，得到二氧化氯含量约为100 mg/L的复合亚氯酸钠溶液，将2%的成膜基质与21.1%的保护剂加入100ml水中，与复合亚氯酸钠溶液按1：1混合搅拌均匀，即得奶牛乳头药浴液。
3.主要理化指标考察
（1）理化指标检测
本文根据2020版《中国兽药典》，对复合亚氯酸钠泡腾片的状、崩解时限、重量差异、脆碎度、硬度、pH值进行了考察，对成膜基质及保护剂的性状、pH、成膜时间、膜粘附力、膜的透气性、离心实验进行了考察。
（2）药浴液有效成分含量测定
本文根据GB 26366-2010《二氧化氯消毒及卫生标准》的标准，采用五步碘量法对药浴液有效成分即二氧化氯含量进行测定。
4.杀菌性能及皮肤刺激性评价试验
（1）杀菌试验
本文根据2002版《消毒技术规范》配置所需浓度的菌悬液，进行培养计数后，进行中和剂鉴定试验及悬液定量杀菌试验，记录结果。
（2）动物刺激性试验
本文进行完整皮肤刺激性试验、破损皮肤刺激性试验，同时分单次给药、多次给药，记录结果。
5.药浴剂稳定性试验
本文根据2020版《中国兽药典》，对药浴剂进行稳定性实验：将药浴液现场配置，置于棕色广口瓶中，室温（25±2）℃密闭避光放置，每24h取样检测二氧化氯含量，连续检测9天。
二、结果与讨论
1.主要理化指标考察
（1）复合亚氯酸钠泡腾片
取复合亚氯酸钠泡腾片，在白色背景下观察样品外观及性状为类白色片剂。经试验得出：片剂硬度为5～7kg/cm2;测试浓度为1：1000（片剂g：蒸馏水mL）时的pH值指标介于5.0～7.0;在5min内能崩解完全;片重差异限度在±2%以内。试验结果均符合《中国兽药典》要求，能够有效避免片剂在包装、贮存、运输发生的破损现象。
（2）成膜基质及保护剂
取成膜基质及保护剂，按1：10比例混合，得到无色透明凝胶。经试验得出：用常规酸度计测定pH值介于6.0～7.0，不会对皮肤造成刺激;成膜时间在7～10min之间，可以有效防止细菌侵入;膜粘附力在40～60g之间，吸收良好，作用时间长;同时透气性良好，经半径为10cm、转速4000r/min，离心15min，均无分层现象，表明成膜剂及保护剂稳定性良好。
（3）药浴液有效成分含量测定
取复合亚氯酸钠泡腾片，分别进行精密称定，置已加40 ml水的50 mL棕色容量瓶中，待溶解完毕后，加水稀释至刻度，在暗处放置10 min活化，摇匀，并将活化好的溶液稀释于500 mL棕色容量瓶中，取配置好的溶液与含有2%成膜基质、21.1%保护剂的500mL溶液混合，测定结果表明药浴液中二氧化氯平均含量为53.16mg/L，RSD为0.07%，表明药浴液二氧化氯含量达到《中国兽药典》要求，可以达到杀菌效果。
2.杀菌性能及皮肤刺激性评价试验
（1）杀菌试验
以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为实验菌，对中和剂进行筛选，将试验分为6组，重复三次，结果见表2。
取菌悬液，将1mL含有有机干扰物质的菌悬液和4mL测试浓度药浴液（阳性对照组为PBS）在无菌管中混合均匀，反应至各预定时间。移取1 mL混合液加至含有9 mL中和剂的无菌试管中混匀，中和10 min后，取上述各管最终样液1 mL分别接种至营养琼脂培养基，在37 ℃恒温箱中培养至规定时间计数，计算杀菌率。实验重复3次，取平均值，试验结果表明药浴液的杀菌效果良好，溶液中二氧化氯浓度为50 mg/L时，作用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌5min，就能完全杀灭细菌。
（2）动物刺激性试验
对家兔进行皮肤刺激性实验：用脱毛剂在家兔背部脊柱制备4块脱毛区域，各约3cm×3cm，然后将药浴液直接滴于面积为2.5cm×2.5cm的一侧去毛完整皮肤上。同时将一部分脱毛后的家兔用75%酒精清洁2.5cm×2.5cm的去毛皮肤、然后进行消毒。消毒完毕后，使用注射针头在皮区内划一个“井”形的破损伤口，划痕间距为0.5cm。每只家兔2个脱毛区分别涂抹药浴剂、生理盐水，涂抹后用纱布覆盖并用医用橡膠固定。贴敷固定24h后，移去贴敷物，用温水清洁将水分吸干。 给药方式为单次（去除受试物后1h、24h和48h观察皮肤局部反应，有无红斑和水肿的情况）、多次（按照单次给药的方法，连续给药7d，每天一次，最后一次给药24h后，用温水洗去药物，观察皮肤局部反应，有无红斑和水肿的情况）给药，使用生理盐水作为对照组，进行实验。
实验结果表明：单次给药后，完整皮肤与破损皮肤均无红斑、水肿;多次给药后，药浴液和生理盐水对完整皮肤均无红斑、水肿，对破损皮肤在使用药浴液清洗后在1h内出现轻度刺激作用，但较快消退，说明本文所述药浴液对皮肤无刺激性。
3.药浴剂稳定性试验
配置药浴液，置于棕色广口瓶，室温室温（25±2）℃密闭避光放置。每24h取样检测二氧化氯含量，连续检测9天，试验结果表明药浴液中二氧化氯含量在前7天浓度在45mg/L以上，药浴液可正常使用，第8、9天后二氧化氯的含量下降到45mg/L以下，药浴液不能正常使用，在常温下配置好后，可放置7天，若超过时间则需重新配置。
三、结论
（1）以复合亚氯酸钠泡腾片为主剂，改性海藻酸钠及镇痛抑菌剂作为成膜基质和保护剂的主要成分，运用二氧化氯对细菌的灭杀效果，制备出了奶牛用乳头药浴液。
（2）通过对理化指标的考察，得到复合亚氯酸钠泡腾片的性状、pH、崩解时限、重量差异、脆碎度、硬度均符合《中国兽药典》要求;成膜基质及保护剂的性状、pH、稳定性均符合《中国兽药典》要求，其成膜时间短，膜粘附力强，膜的透气性好，符合成膜基质相关质量要求。采用碘量法测定药浴剂中有效成分的含量，并进行方法学研究，结果表明：该方法准确度高、精密度好、重复性好，可用于检测本品有效成分含量。
（3）药浴剂杀菌性能良好，二氧化氯含量为50mg/L时作用细菌5min，可完全杀灭黄色葡萄球菌和大肠杆菌。本研究制备的药浴剂具有杀菌性能好，安全性高的优点。皮肤刺激性试验中未出现红斑和水肿，表明无刺激、无毒性可用于奶牛临床试验。
（4）通过药浴液稳定性考察得到，密闭避光条件下，本药浴液的有效期为7天。
四、展望
本文所述药浴液对预防乳房炎有很大的功效，各方面符合国家要求。在针对市场需求的方面，我们的药浴液有着充分的效果、运输、安全与无残留的优势，可以在市场上占有一席之地。随着我们药浴液的研制，乳房炎带来的损失可以大大降低，畜牧业的发展可以更进一步。
[1].叶倩， 王礼伟， 屈勇刚， 等. 奶牛乳房炎防治的研究进展. 现代畜牧兽医， 2014， （1）： 56-61
[2].杨亚东， 李飞， 杨一鸣， 等.奶牛乳房炎致病菌的分离鉴定及药敏试验. 中国乳业， 2013： 2
[3].B. R. Shome， S. D. Mitra， M. Bhuvana， et al. Multiplex PCR Assay for Species Identification of Bovine Mastitis Pathogens. Journal of Applied Microbiology， 2011
[4].方雪強. 奶牛场乳头药浴液的选择. 中国奶牛， 2014（09）： 48-50
（1.河北科技大学化学与制药工程学院，河北，石家庄，050000）
（2.河北科技大学建筑工程学院，河北，石家庄，050000）
作者简介：王浩天，2001年10月出省，男，汉族，河北省唐山市路北区人，河北科技大学本科在校生，研究方向：兽药产品开发。
关键词：奶牛乳头，药浴液，性能，评价
奶制品安全问题一直以来都是人民健康和国计民生的重大问题，关系到人民群众的切身利益，奶牛乳房炎造成的损失很大[1]。其由环境，饲养管理等因素引起[2，3]，市面上的药浴液在效果，运输，残留等方面存在问题[4]，所以研制一种安全、高效、绿色、廉价的药浴液用于预防奶牛乳房炎是很有意义的。
本文介绍一种奶牛用乳头药浴液，运用二氧化氯具有的安全、高效杀菌原理，可以有效、快速的对奶牛乳头部位进行消毒杀菌，同时成膜基质能在乳头表面形成薄膜，保护皮肤，保护剂可以对破损、伤患处进行抗炎、镇痛，与二氧化氯共同达到抑菌的效果。该药浴液主要由复合亚氯酸钠泡腾片（主要成分为亚氯酸钠）、成膜基质（主要成分为改性海藻酸钠）、保护剂（主要成分为镇痛抑菌剂）组成，使用时现场配置，药浴液中二氧化氯含量约为45～50mg/L。
一、实验部分
1.试剂与仪器
（1）主要原料
复合亚氯酸钠泡腾片、成膜基质、保护剂。
（2）仪器
电子精密天平：量程0～200g，感量1mg;片剂硬度测试仪;脆碎度测试仪;精密酸度计;低速台式离心机;紫外分光光度计;立式压力蒸汽灭菌器;电热恒温水浴锅;水浴恒温振荡器.
2.药浴剂的制备
取1片复合亚氯酸钠泡腾片在在含有50 mL水的密闭容器中活化10 min，然后稀释10倍，得到二氧化氯含量约为100 mg/L的复合亚氯酸钠溶液，将2%的成膜基质与21.1%的保护剂加入100ml水中，与复合亚氯酸钠溶液按1：1混合搅拌均匀，即得奶牛乳头药浴液。
3.主要理化指标考察
（1）理化指标检测
本文根据2020版《中国兽药典》，对复合亚氯酸钠泡腾片的状、崩解时限、重量差异、脆碎度、硬度、pH值进行了考察，对成膜基质及保护剂的性状、pH、成膜时间、膜粘附力、膜的透气性、离心实验进行了考察。
（2）药浴液有效成分含量测定
本文根据GB 26366-2010《二氧化氯消毒及卫生标准》的标准，采用五步碘量法对药浴液有效成分即二氧化氯含量进行测定。
4.杀菌性能及皮肤刺激性评价试验
（1）杀菌试验
本文根据2002版《消毒技术规范》配置所需浓度的菌悬液，进行培养计数后，进行中和剂鉴定试验及悬液定量杀菌试验，记录结果。
（2）动物刺激性试验
本文进行完整皮肤刺激性试验、破损皮肤刺激性试验，同时分单次给药、多次给药，记录结果。
5.药浴剂稳定性试验
本文根据2020版《中国兽药典》，对药浴剂进行稳定性实验：将药浴液现场配置，置于棕色广口瓶中，室温（25±2）℃密闭避光放置，每24h取样检测二氧化氯含量，连续检测9天。
二、结果与讨论
1.主要理化指标考察
（1）复合亚氯酸钠泡腾片
取复合亚氯酸钠泡腾片，在白色背景下观察样品外观及性状为类白色片剂。经试验得出：片剂硬度为5～7kg/cm2;测试浓度为1：1000（片剂g：蒸馏水mL）时的pH值指标介于5.0～7.0;在5min内能崩解完全;片重差异限度在±2%以内。试验结果均符合《中国兽药典》要求，能够有效避免片剂在包装、贮存、运输发生的破损现象。
（2）成膜基质及保护剂
取成膜基质及保护剂，按1：10比例混合，得到无色透明凝胶。经试验得出：用常规酸度计测定pH值介于6.0～7.0，不会对皮肤造成刺激;成膜时间在7～10min之间，可以有效防止细菌侵入;膜粘附力在40～60g之间，吸收良好，作用时间长;同时透气性良好，经半径为10cm、转速4000r/min，离心15min，均无分层现象，表明成膜剂及保护剂稳定性良好。
（3）药浴液有效成分含量测定
取复合亚氯酸钠泡腾片，分别进行精密称定，置已加40 ml水的50 mL棕色容量瓶中，待溶解完毕后，加水稀释至刻度，在暗处放置10 min活化，摇匀，并将活化好的溶液稀释于500 mL棕色容量瓶中，取配置好的溶液与含有2%成膜基质、21.1%保护剂的500mL溶液混合，测定结果表明药浴液中二氧化氯平均含量为53.16mg/L，RSD为0.07%，表明药浴液二氧化氯含量达到《中国兽药典》要求，可以达到杀菌效果。
2.杀菌性能及皮肤刺激性评价试验
（1）杀菌试验
以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为实验菌，对中和剂进行筛选，将试验分为6组，重复三次，结果见表2。
取菌悬液，将1mL含有有机干扰物质的菌悬液和4mL测试浓度药浴液（阳性对照组为PBS）在无菌管中混合均匀，反应至各预定时间。移取1 mL混合液加至含有9 mL中和剂的无菌试管中混匀，中和10 min后，取上述各管最终样液1 mL分别接种至营养琼脂培养基，在37 ℃恒温箱中培养至规定时间计数，计算杀菌率。实验重复3次，取平均值，试验结果表明药浴液的杀菌效果良好，溶液中二氧化氯浓度为50 mg/L时，作用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌5min，就能完全杀灭细菌。
（2）动物刺激性试验
对家兔进行皮肤刺激性实验：用脱毛剂在家兔背部脊柱制备4块脱毛区域，各约3cm×3cm，然后将药浴液直接滴于面积为2.5cm×2.5cm的一侧去毛完整皮肤上。同时将一部分脱毛后的家兔用75%酒精清洁2.5cm×2.5cm的去毛皮肤、然后进行消毒。消毒完毕后，使用注射针头在皮区内划一个“井”形的破损伤口，划痕间距为0.5cm。每只家兔2个脱毛区分别涂抹药浴剂、生理盐水，涂抹后用纱布覆盖并用医用橡膠固定。贴敷固定24h后，移去贴敷物，用温水清洁将水分吸干。 给药方式为单次（去除受试物后1h、24h和48h观察皮肤局部反应，有无红斑和水肿的情况）、多次（按照单次给药的方法，连续给药7d，每天一次，最后一次给药24h后，用温水洗去药物，观察皮肤局部反应，有无红斑和水肿的情况）给药，使用生理盐水作为对照组，进行实验。
实验结果表明：单次给药后，完整皮肤与破损皮肤均无红斑、水肿;多次给药后，药浴液和生理盐水对完整皮肤均无红斑、水肿，对破损皮肤在使用药浴液清洗后在1h内出现轻度刺激作用，但较快消退，说明本文所述药浴液对皮肤无刺激性。
3.药浴剂稳定性试验
配置药浴液，置于棕色广口瓶，室温室温（25±2）℃密闭避光放置。每24h取样检测二氧化氯含量，连续检测9天，试验结果表明药浴液中二氧化氯含量在前7天浓度在45mg/L以上，药浴液可正常使用，第8、9天后二氧化氯的含量下降到45mg/L以下，药浴液不能正常使用，在常温下配置好后，可放置7天，若超过时间则需重新配置。
三、结论
（1）以复合亚氯酸钠泡腾片为主剂，改性海藻酸钠及镇痛抑菌剂作为成膜基质和保护剂的主要成分，运用二氧化氯对细菌的灭杀效果，制备出了奶牛用乳头药浴液。
（2）通过对理化指标的考察，得到复合亚氯酸钠泡腾片的性状、pH、崩解时限、重量差异、脆碎度、硬度均符合《中国兽药典》要求;成膜基质及保护剂的性状、pH、稳定性均符合《中国兽药典》要求，其成膜时间短，膜粘附力强，膜的透气性好，符合成膜基质相关质量要求。采用碘量法测定药浴剂中有效成分的含量，并进行方法学研究，结果表明：该方法准确度高、精密度好、重复性好，可用于检测本品有效成分含量。
（3）药浴剂杀菌性能良好，二氧化氯含量为50mg/L时作用细菌5min，可完全杀灭黄色葡萄球菌和大肠杆菌。本研究制备的药浴剂具有杀菌性能好，安全性高的优点。皮肤刺激性试验中未出现红斑和水肿，表明无刺激、无毒性可用于奶牛临床试验。
（4）通过药浴液稳定性考察得到，密闭避光条件下，本药浴液的有效期为7天。
四、展望
本文所述药浴液对预防乳房炎有很大的功效，各方面符合国家要求。在针对市场需求的方面，我们的药浴液有着充分的效果、运输、安全与无残留的优势，可以在市场上占有一席之地。随着我们药浴液的研制，乳房炎带来的损失可以大大降低，畜牧业的发展可以更进一步。
[1].叶倩， 王礼伟， 屈勇刚， 等. 奶牛乳房炎防治的研究进展. 现代畜牧兽医， 2014， （1）： 56-61
[2].杨亚东， 李飞， 杨一鸣， 等.奶牛乳房炎致病菌的分离鉴定及药敏试验. 中国乳业， 2013： 2
[3].B. R. Shome， S. D. Mitra， M. Bhuvana， et al. Multiplex PCR Assay for Species Identification of Bovine Mastitis Pathogens. Journal of Applied Microbiology， 2011
[4].方雪強. 奶牛场乳头药浴液的选择. 中国奶牛， 2014（09）： 48-50
（1.河北科技大学化学与制药工程学院，河北，石家庄，050000）
（2.河北科技大学建筑工程学院，河北，石家庄，050000）
作者简介：王浩天，2001年10月出省，男，汉族，河北省唐山市路北区人，河北科技大学本科在校生，研究方向：兽药产品开发。