【摘 要】
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利用PCR技术从含有霍乱毒素B亚单位(CTB)基因的质粒pUCT1中扩增出不包括信号肽的309bp的CTB全基因,并通过点突变技术消除了CTB阅读框内的终止密码子(TAA→GAA),以便于在CTB基
【机 构】
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中国兽药监察所,解放军军需大学,山西省临猗县畜牧局
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利用PCR技术从含有霍乱毒素B亚单位(CTB)基因的质粒pUCT1中扩增出不包括信号肽的309bp的CTB全基因,并通过点突变技术消除了CTB阅读框内的终止密码子(TAA→GAA),以便于在CTB基因的下游融合其他的外源基因.用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ对PCR产物进行双酶切,以T4DNA连接酶将其定向连接于经同样酶切处理的质粒pET-28b(+)的多克隆位点上,构建成重组质粒pECTB,转化至BL21(DE3)中.经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切分析和PCR扩增检测,证明重组质粒pECTB中含有CTB基因.核苷酸序列分析表明,克隆的CTB基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的.
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