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[摘要] 目的：观察糖尿病大鼠泪糖的变化及其与血糖、尿糖相关性。 方法：SD大鼠随机分为正常对照组和链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病实验组；在造模前、给药72h后、造模后1周、1月、2月，分别进行体重、泪糖、血糖、尿糖的测定；观察两组各个指标造模前后的变化。结果：糖尿病大鼠泪糖、血糖、尿糖分别与正常组相比有显著差异。泪糖和血糖的升高不存在明显的线性关系（P＞0.05）；血糖在给药72h后达到高水平，并一直呈高水平状态；泪糖呈一过性高水平的状态，回降后随着病程的发展而呈缓慢升高的趋势，最后稳定在强阳性。泪糖在造模72h时80％达到+++，10％达到++++；在造模1周时60％降至++，只有30％处于+++以上；造模1个月时80％达到+++以上；造模2个月时100％处于++++。结论：糖尿病大鼠泪糖的变化具有显著意义，泪糖的含量可以反映糖尿病病程的进展状况；具有简单，灵敏，高效的泪糖测量方法可以作为临床糖尿
[关键词] 泪糖 血糖 尿糖 糖尿病
糖尿病是一种常见病、多发病。临床上通常把检测血糖作为诊断糖尿病的重要方法之一。但血糖易受多种因素的影响，如糖尿病患者的血糖水平极不稳定，且采集时具有创伤性。本研究旨在检测糖尿病大鼠泪糖含量，明确其与血糖、尿糖的相关性，以探讨早期确诊糖尿病的简单有效的方法。
1 材料
1.1 实验动物与环境
SD大鼠30只，雄性，体重在200～250g，购于上海斯莱克实验动物有限公司。饲养于室温24～26℃，湿度52％的清洁实验室，安静无噪声，自由饮水，饮食。
1.2 药品与试剂
链脲佐菌素（STZ）为美国Sigma公司产品，三诺安稳血糖试纸购于长沙三诺公司，尿糖分析试纸条（化学分析法），新型高灵敏葡萄糖试纸（桂林中辉生物技术有限公司），风油精，75％的酒精。
2 方法
2.1 糖尿病大鼠模型的建立
大鼠适应性喂养一周，随机标记并取10只做正常对照组（CON）， 20只制作糖尿病（DM）模型，作为实验组。禁食12h，腹腔注射。实验组（DM）：STZ按1％的浓度溶解于0.1mmol/L的柠檬酸缓冲液（pH4.2～4.5），以65mg/kg进行腹腔注射。正常对照组（CON）：以同等剂量的0.1mmol/L柠檬酸缓冲液进行腹腔注射。72h后，血糖大于16.7mmol/L，尿糖呈+++以上确定为造模成功。
2.2 血糖的测量
采用葡萄糖氧化酶法，用三诺安稳血糖仪测量。空腹采取尾静脉血，于四个时间段测定。
2.3 泪糖的测量
采用葡萄糖氧化酶法，利用高灵敏葡萄糖试纸测量（比色法）。用风油精或清凉油涂少许于大鼠下眼睑外皮肤，几十秒后用修剪好的且弯曲的高灵敏葡萄糖试纸至于下眼睑穹窿部10秒后取出， 30秒时观察有无颜色反应，判断阴阳性；60秒时与比色卡对比，半定量的读取数据。数据的读取由三个与本实验无关且色觉正常的人员分别读取，取中间数据。把0～0.55mmol/L作为-， 0.55～2.80mmol/L作为+， 2.80～5.50mmol/L作为++，5.50～16.6mmol/L作为+++，＞16.6mmol/L作为++++。如图1
图1 高灵敏泪糖试纸比色卡
2.4 尿糖的测量
采用葡萄糖氧化酶法，用尿糖分析试纸条测量（比色法）。大鼠提尾反射产生的尿液收集于干净的容器，将试纸的试垫区浸入样本中约2秒取出，沿着容器边缘去除残余尿液，横握试纸，在30～60秒钟内与标签上的比色图谱比较。同样由三位与实验无关且色觉正常人员读取数据，取中间值。
2.5统计分析
采用SPSS10.0统计分析软件对结果进行处理，计量资料以均数±标准差（ ±s）表示各组间比较方差分析。两两比较采用t检验；各指标间相关性采用直接相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 大鼠的整体情况
对照组大鼠体重增长速度快，体毛光泽良好，摄食、饮水、尿量均正常。模型组的体重增长极其缓慢，毛色枯黄脱落，表现出多饮、多食、多尿症状。图1显示体重变化趋势。
表1 大鼠体重变化（g）
造模前 造模72h 造模1周 造模1月 造模2月
糖尿病组 284.11±19.972 283.67±15.564 296.22±18.040 323.22±28.995 341.33±33.470
对照组 289.50±20.506 328.00±16.971 365.00±16.971 504.50±21.920 595.00±27.071
注：造模后糖尿病组和对照组相比，P＜0.01。
3.2 大鼠的血糖变化情况
正常对照组血糖始终处于正常范围，造模组在链脲佐菌素（STZ）的诱导下血糖水平与造模前相比，血糖升高极其显著（P=0.000＜0.01），并且稳定在高水平状态。
表2 各组大鼠血糖的变化（mmol/L）
注：★ 糖尿病组的血糖与对照组相比，P＜0.01，糖尿病组的血糖各时间点与造模前相比，P＜0.01；
3.3 大鼠的泪糖变化情况
大鼠血糖在糖尿病组中，泪糖在给药72h后，即刻产生较强的阳性反应且阳性率达到百分百。造模72h后出现泪糖的一过性高水平，80％达到+++，10％达到++++。在造模1周时60％降至++，只有30％处于+++以上；造模1个月时80％达到+++以上；造模两个月时100％处于++++。随着糖尿病病程的进展，泪液含糖量整体呈上升趋势。对照组始终呈阴性（如表3所示）。
表3 糖尿病大鼠泪糖的变化
3.4 大鼠的尿糖变化情况
糖尿病大鼠尿糖一直呈现强阳性状态。对照组始终呈阴性，如表4所示。
表4 糖尿病组大鼠尿糖的变化情况
3.5 统计分析
利用等级（秩）变量间的相关分析，分别对各个时间点上的血糖和泪糖进行相关性分析。P值均大于0.05,差异不显著，说明泪糖的水平与血糖的水平在同一时间点上不存在明显的相关性。
4 讨论
4.1 糖尿病大鼠模型的建立
一次性大剂量注射链脲佐菌素（65mg/kg）确实可以使空腹血糖明显升高，形成糖尿病，成模率高，是获得稳定、典型的糖尿病模型的一种简单、高效的方法 [1]。在预实验过程中，发现造模不是简单的按照说明进行，环境、鼠龄、禁食时间、注射选时、注射的速度等都可以影响需要注射的剂量。 在清洁实验室内，大鼠的生长环境良好，造模过程中，感染的机会相对少，耐受力较强，则需要给予的剂量偏高。禁食的时间越长，STZ对胰岛β细胞破坏力越明显，所以延长禁食时间可以降低STZ剂量。另外，很多文献叙述大鼠造模一段时间会出现体重下降，本实验中，按规律的喂养，达到自由摄食，饮水，且生长在安静且清洁的实验室，糖尿病组的大鼠并不出现体重下降，反而稳步上升，与对照组相比，只是大大减缓了增长的速度；大鼠体重增减，主要取决于大鼠的耐受力与药物的毒性（STZ的剂量与质量）。
4.2 糖尿病大鼠泪液含糖量的变化
泪液是泪腺分泌的一种水样液体（95％以上），大部分泪液来自于主泪腺，少部分来自于副泪腺；还含有睑板腺及杯状细胞的分泌物、角结膜的代谢物等[2]。正常情况下的泪液含糖量是极其甚微的，在正常人中为0.5～0.7µmmol/L，是来源于泪液本身的成分。
[关键词] 泪糖 血糖 尿糖 糖尿病
糖尿病是一种常见病、多发病。临床上通常把检测血糖作为诊断糖尿病的重要方法之一。但血糖易受多种因素的影响，如糖尿病患者的血糖水平极不稳定，且采集时具有创伤性。本研究旨在检测糖尿病大鼠泪糖含量，明确其与血糖、尿糖的相关性，以探讨早期确诊糖尿病的简单有效的方法。
1 材料
1.1 实验动物与环境
SD大鼠30只，雄性，体重在200～250g，购于上海斯莱克实验动物有限公司。饲养于室温24～26℃，湿度52％的清洁实验室，安静无噪声，自由饮水，饮食。
1.2 药品与试剂
链脲佐菌素（STZ）为美国Sigma公司产品，三诺安稳血糖试纸购于长沙三诺公司，尿糖分析试纸条（化学分析法），新型高灵敏葡萄糖试纸（桂林中辉生物技术有限公司），风油精，75％的酒精。
2 方法
2.1 糖尿病大鼠模型的建立
大鼠适应性喂养一周，随机标记并取10只做正常对照组（CON）， 20只制作糖尿病（DM）模型，作为实验组。禁食12h，腹腔注射。实验组（DM）：STZ按1％的浓度溶解于0.1mmol/L的柠檬酸缓冲液（pH4.2～4.5），以65mg/kg进行腹腔注射。正常对照组（CON）：以同等剂量的0.1mmol/L柠檬酸缓冲液进行腹腔注射。72h后，血糖大于16.7mmol/L，尿糖呈+++以上确定为造模成功。
2.2 血糖的测量
采用葡萄糖氧化酶法，用三诺安稳血糖仪测量。空腹采取尾静脉血，于四个时间段测定。
2.3 泪糖的测量
采用葡萄糖氧化酶法，利用高灵敏葡萄糖试纸测量（比色法）。用风油精或清凉油涂少许于大鼠下眼睑外皮肤，几十秒后用修剪好的且弯曲的高灵敏葡萄糖试纸至于下眼睑穹窿部10秒后取出， 30秒时观察有无颜色反应，判断阴阳性；60秒时与比色卡对比，半定量的读取数据。数据的读取由三个与本实验无关且色觉正常的人员分别读取，取中间数据。把0～0.55mmol/L作为-， 0.55～2.80mmol/L作为+， 2.80～5.50mmol/L作为++，5.50～16.6mmol/L作为+++，＞16.6mmol/L作为++++。如图1
图1 高灵敏泪糖试纸比色卡
2.4 尿糖的测量
采用葡萄糖氧化酶法，用尿糖分析试纸条测量（比色法）。大鼠提尾反射产生的尿液收集于干净的容器，将试纸的试垫区浸入样本中约2秒取出，沿着容器边缘去除残余尿液，横握试纸，在30～60秒钟内与标签上的比色图谱比较。同样由三位与实验无关且色觉正常人员读取数据，取中间值。
2.5统计分析
采用SPSS10.0统计分析软件对结果进行处理，计量资料以均数±标准差（ ±s）表示各组间比较方差分析。两两比较采用t检验；各指标间相关性采用直接相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 大鼠的整体情况
对照组大鼠体重增长速度快，体毛光泽良好，摄食、饮水、尿量均正常。模型组的体重增长极其缓慢，毛色枯黄脱落，表现出多饮、多食、多尿症状。图1显示体重变化趋势。
表1 大鼠体重变化（g）
造模前 造模72h 造模1周 造模1月 造模2月
糖尿病组 284.11±19.972 283.67±15.564 296.22±18.040 323.22±28.995 341.33±33.470
对照组 289.50±20.506 328.00±16.971 365.00±16.971 504.50±21.920 595.00±27.071
注：造模后糖尿病组和对照组相比，P＜0.01。
3.2 大鼠的血糖变化情况
正常对照组血糖始终处于正常范围，造模组在链脲佐菌素（STZ）的诱导下血糖水平与造模前相比，血糖升高极其显著（P=0.000＜0.01），并且稳定在高水平状态。
表2 各组大鼠血糖的变化（mmol/L）
注：★ 糖尿病组的血糖与对照组相比，P＜0.01，糖尿病组的血糖各时间点与造模前相比，P＜0.01；
3.3 大鼠的泪糖变化情况
大鼠血糖在糖尿病组中，泪糖在给药72h后，即刻产生较强的阳性反应且阳性率达到百分百。造模72h后出现泪糖的一过性高水平，80％达到+++，10％达到++++。在造模1周时60％降至++，只有30％处于+++以上；造模1个月时80％达到+++以上；造模两个月时100％处于++++。随着糖尿病病程的进展，泪液含糖量整体呈上升趋势。对照组始终呈阴性（如表3所示）。
表3 糖尿病大鼠泪糖的变化
3.4 大鼠的尿糖变化情况
糖尿病大鼠尿糖一直呈现强阳性状态。对照组始终呈阴性，如表4所示。
表4 糖尿病组大鼠尿糖的变化情况
3.5 统计分析
利用等级（秩）变量间的相关分析，分别对各个时间点上的血糖和泪糖进行相关性分析。P值均大于0.05,差异不显著，说明泪糖的水平与血糖的水平在同一时间点上不存在明显的相关性。
4 讨论
4.1 糖尿病大鼠模型的建立
一次性大剂量注射链脲佐菌素（65mg/kg）确实可以使空腹血糖明显升高，形成糖尿病，成模率高，是获得稳定、典型的糖尿病模型的一种简单、高效的方法 [1]。在预实验过程中，发现造模不是简单的按照说明进行，环境、鼠龄、禁食时间、注射选时、注射的速度等都可以影响需要注射的剂量。 在清洁实验室内，大鼠的生长环境良好，造模过程中，感染的机会相对少，耐受力较强，则需要给予的剂量偏高。禁食的时间越长，STZ对胰岛β细胞破坏力越明显，所以延长禁食时间可以降低STZ剂量。另外，很多文献叙述大鼠造模一段时间会出现体重下降，本实验中，按规律的喂养，达到自由摄食，饮水，且生长在安静且清洁的实验室，糖尿病组的大鼠并不出现体重下降，反而稳步上升，与对照组相比，只是大大减缓了增长的速度；大鼠体重增减，主要取决于大鼠的耐受力与药物的毒性（STZ的剂量与质量）。
4.2 糖尿病大鼠泪液含糖量的变化
泪液是泪腺分泌的一种水样液体（95％以上），大部分泪液来自于主泪腺，少部分来自于副泪腺；还含有睑板腺及杯状细胞的分泌物、角结膜的代谢物等[2]。正常情况下的泪液含糖量是极其甚微的，在正常人中为0.5～0.7µmmol/L，是来源于泪液本身的成分。