人GM-CSF在大肠杆菌中的表达及纯化

来源 :中山大学学报:自然科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:n62315942
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通过PCR定点突变,对编码人GM-CSF因子成熟蛋白基因的5′端进行改造.将改造的GM-CSF基因克隆入质粒pBV220,构建成表达质粒pBV220-GM-CSF,将其转化DH5a感受态菌后,在温度诱导下,GM-CSF非融合基因获得了表达,表达产物以包涵体形式沉积在细胞内,占细胞总蛋白的13%,并能特异地与抗人GM-CSF单克隆抗体结合.通过对包涵体的提取、裂解,得到变性的GM-CSF,再经疏水柱层析,凝胶过滤,可纯化出GM-CSF,纯度达99%以上,比活达1.28×107u/mg,能维持依赖人
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