【摘 要】
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采用荧光染料(Cy5)标记中国辽宁蛇岛蝮(Gloydius shedaoensis shedaoensis,GSS)蛇毒(snake venom,SV,GSS-SV)蛋白质,获得了该蛇毒的双向十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D
【机 构】
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大连医科大学临床医学系,大连,116044大连医科大学生化与分子生物学教研室,大连,116044;大连医科大学基础医学院生物技术系,大连,116044;辽宁蛇岛老铁山自然保护区管理处,大连,11604
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采用荧光染料(Cy5)标记中国辽宁蛇岛蝮(Gloydius shedaoensis shedaoensis,GSS)蛇毒(snake venom,SV,GSS-SV)蛋白质,获得了该蛇毒的双向十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D SDS-PAGE)图谱,经DeCyder软件分析,分辨出1 000多个蛋白点,分子量范围在10～150 之间,等电点在4～7的蛋白质点占78.8%.凝胶后染色(post-staining)采用蛋白荧光染料Deep Purple,选取的5个蛋白点经胶内酶解,产生的肽段经高效液相色谱-电喷雾串联质谱(high performance liquid ehromatography/HPLC-electro-spray ionization tandem mass spectrometry/ESI-MS/MS,HPLC-ESI-MS/MS)进行序列测定,质谱数据经Sequest Bioworks软件分析,为蛇毒L-氨基酸氧化酶、金属蛋白酶、类凝血酶、纤溶酶原激活物和磷脂酶A2的同源蛋白.本研究采用的荧光标记2D SDS-PAGE结合HPLC-ESI-MS/MS的技术适于高通量研究蛇毒蛋白组成.
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