【摘 要】
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目的 改造、表达人PUMA-BH3结构域基因,并检测其抗肿瘤活性.方法 改造PUMA BH3结构域两端的氨基酸序列(A134G、G138A、Q151M),并在C端加上5个连续的精氨酸,人工合成相应的核
【机 构】
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哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 哈尔滨市,150081
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目的 改造、表达人PUMA-BH3结构域基因,并检测其抗肿瘤活性.方法 改造PUMA BH3结构域两端的氨基酸序列(A134G、G138A、Q151M),并在C端加上5个连续的精氨酸,人工合成相应的核苷酸序列,连接到质粒pTWIN1中,再转化至大肠埃希菌BL21 (DE3)中表达,经几丁质亲和层析树脂一步纯化获得M28肽.分别用MTT比色法测定细胞增殖的抑制,AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化.结果 M28肽对人SGC-7901胃腺癌细胞的增殖具有明显的抑制作用,且存在量效关系,活性强于PUMA-BH3肽.作用24h后,观察到细胞凋亡现象,M28肽处理组凋亡细胞数量较PUMA-BH3肽组明显增加,细胞凋亡率大于50％;弱荧光细胞比例增加到90％以上,提示SGC-7901细胞线粒体内膜功能受损.结论 M28肽具有更强抗肿瘤活性,且生产工艺简单,在肿瘤治疗上有潜在的应用价值.
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