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【摘 要】目的：探討不同频率振法对制动肌肉萎缩大鼠神经纤维的trpv1的通道表达的影响。方法：采用SD大鼠72只，随机分为空白组和模型组，A组（100次/min，5min）、B组（300次/min，5min）、C组（500次/min，5min）、D组（800次/min，5min），每组12只；模型组大鼠以后肢制动方法为废用模型，制动一周后，A、B、C、D组予振法干预，每日2次。干预1周后，比较各组大鼠比目鱼肌神经纤维的trpv1的通道表达。结果：模型组的比目鱼肌神经纤维的trpv1表达弱于空白组，300次/min、500次/min组的trpv1表达强于空白组，有显著差异，300次/min最佳。结论：制动大鼠肌肉萎缩的神经冲动呈减弱趋势，振法可以促进制动大鼠肌肉萎缩的神经冲动，以300次/分最佳。
【关键词】肌萎缩；trpv1；振法
【中图分类号】G 804.2 【文献标识码】A
运动缺乏、制动或肌肉去负荷可使骨骼肌发生明显的废用肌萎缩，目前临床上多见的颈腰椎疾病，多见于经常处于制动体位的伏案工作者，不排除这些人群存在局部肌肉萎缩。同时很多运动系统痛症例如颈腰椎和肢体痛来自于局部肌肉萎缩及其导致的运动功能异常[1]。振法是中医传统推拿手法，振法可以使治疗局部产生同频共振，可以改善肌肉组织的代谢和营养，同时具有解除痉挛，调节内分泌和植物神经功能等作用[2-4]。本研究以大鼠后肢制动作为肌肉废用模型，探究不同频率振法对制动大鼠萎缩比目鱼肌的trpv1通道的影响，为振法防止废用性肌肉萎缩提供实验依据。
1 研究对象和方法
1.1 动物选择与分组
选择采用成年SD大鼠，体重190g-300g，雌雄各半，福建医科大学动物中心提供。雌雄大鼠各随机分为6组：空白组、病理模型组、A组（100次/min，5min）、B组（300次/min，5min）、C组（500次/min，5min）、D组（800次/min，5min），每组l2只，雌雄各半。
1.2 动物模型的建立
大鼠腹腔麻醉后，在其右侧后肢血管容易受压处衬层棉垫，石膏绷带由踝关节向上缠绕至大腿与腹股沟处，踝关节跖曲（约120°）而膝关节屈曲（约35°）位，使SOL处于缩短位。在最外层涂抹饱和苦味酸与辣椒素的混合液，两周时间。
1.3 干预方法
制动一周后，将A-D组大鼠固定，局部开窗，采用振动器对大鼠右侧比目鱼肌按预定频率时间实施振法操作5min，每日2次，一周时间。
1.4 比目鱼肌湿重的测定
所有大鼠均测定右侧比目鱼肌湿重，测定方法为大鼠深麻醉后迅速分离大鼠肌肉，以铝箔包裹置称量天平上，称重，记录肌肉湿重。
1.5 trpv1的检测
1.5.1 取样
大鼠比目鱼肌分离后，取其神经纤维，立即投于液氮中备用。
1.5.2 方法
1.5.2.1总RNA 的提取 取50～100mg冻存的组织样品，经液氮速冻研磨后，收集于1.5mL的Eppendorf管中，加入1mL的TRNgol ，充分混匀，室温放置5 min；4℃、12000r/min离心10min，吸取上清液至另一管中，加入0.2 mL的氯仿，震荡混匀15s，室温静置3min；4℃、12000r/min离心15min，吸取上清液同时加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置30min；4℃、12000r/min离心10min ，去上清液。再向管中加入1 mL体积分数75 %乙醇（DEPC处理过的水配置） 清洗沉淀；4℃、5000 r/min离心5min，弃上清液，室温干燥5min后，管底的RNA 用30μL无RNA 酶的超纯水溶解，存于- 80℃备用。对提取的总RNA 分别用紫外分光光度计和10g/ L 琼脂糖凝胶电泳检测RNA 的浓度及完整性。
1.5.2.2 cDNA 第一链的合成 冰浴上取2μgRNA ， MLV反转录酶1μL ， 5 ×RT Buffer 4μL ，RNA 酶抑制剂1μL，10 mmol/ L dN TPs 1μL，2.5pmol/μLOligodT 2μL，补充DEPC水至20μL，混匀。30℃ 10min，42℃ 60min，99℃ 5 min，终止反应。合成的cDNA置于-20℃保存备用。。
1.5.2.3 trpv1 mRNA 片段的PCR 扩增
【关键词】肌萎缩；trpv1；振法
【中图分类号】G 804.2 【文献标识码】A
运动缺乏、制动或肌肉去负荷可使骨骼肌发生明显的废用肌萎缩，目前临床上多见的颈腰椎疾病，多见于经常处于制动体位的伏案工作者，不排除这些人群存在局部肌肉萎缩。同时很多运动系统痛症例如颈腰椎和肢体痛来自于局部肌肉萎缩及其导致的运动功能异常[1]。振法是中医传统推拿手法，振法可以使治疗局部产生同频共振，可以改善肌肉组织的代谢和营养，同时具有解除痉挛，调节内分泌和植物神经功能等作用[2-4]。本研究以大鼠后肢制动作为肌肉废用模型，探究不同频率振法对制动大鼠萎缩比目鱼肌的trpv1通道的影响，为振法防止废用性肌肉萎缩提供实验依据。
1 研究对象和方法
1.1 动物选择与分组
选择采用成年SD大鼠，体重190g-300g，雌雄各半，福建医科大学动物中心提供。雌雄大鼠各随机分为6组：空白组、病理模型组、A组（100次/min，5min）、B组（300次/min，5min）、C组（500次/min，5min）、D组（800次/min，5min），每组l2只，雌雄各半。
1.2 动物模型的建立
大鼠腹腔麻醉后，在其右侧后肢血管容易受压处衬层棉垫，石膏绷带由踝关节向上缠绕至大腿与腹股沟处，踝关节跖曲（约120°）而膝关节屈曲（约35°）位，使SOL处于缩短位。在最外层涂抹饱和苦味酸与辣椒素的混合液，两周时间。
1.3 干预方法
制动一周后，将A-D组大鼠固定，局部开窗，采用振动器对大鼠右侧比目鱼肌按预定频率时间实施振法操作5min，每日2次，一周时间。
1.4 比目鱼肌湿重的测定
所有大鼠均测定右侧比目鱼肌湿重，测定方法为大鼠深麻醉后迅速分离大鼠肌肉，以铝箔包裹置称量天平上，称重，记录肌肉湿重。
1.5 trpv1的检测
1.5.1 取样
大鼠比目鱼肌分离后，取其神经纤维，立即投于液氮中备用。
1.5.2 方法
1.5.2.1总RNA 的提取 取50～100mg冻存的组织样品，经液氮速冻研磨后，收集于1.5mL的Eppendorf管中，加入1mL的TRNgol ，充分混匀，室温放置5 min；4℃、12000r/min离心10min，吸取上清液至另一管中，加入0.2 mL的氯仿，震荡混匀15s，室温静置3min；4℃、12000r/min离心15min，吸取上清液同时加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置30min；4℃、12000r/min离心10min ，去上清液。再向管中加入1 mL体积分数75 %乙醇（DEPC处理过的水配置） 清洗沉淀；4℃、5000 r/min离心5min，弃上清液，室温干燥5min后，管底的RNA 用30μL无RNA 酶的超纯水溶解，存于- 80℃备用。对提取的总RNA 分别用紫外分光光度计和10g/ L 琼脂糖凝胶电泳检测RNA 的浓度及完整性。
1.5.2.2 cDNA 第一链的合成 冰浴上取2μgRNA ， MLV反转录酶1μL ， 5 ×RT Buffer 4μL ，RNA 酶抑制剂1μL，10 mmol/ L dN TPs 1μL，2.5pmol/μLOligodT 2μL，补充DEPC水至20μL，混匀。30℃ 10min，42℃ 60min，99℃ 5 min，终止反应。合成的cDNA置于-20℃保存备用。。
1.5.2.3 trpv1 mRNA 片段的PCR 扩增