【摘 要】
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目的：制备并鉴定环戊二烯类有机氯农药单克隆抗体。方法以环戊二烯类农药的特征部分为基础设计合成半抗原4-(4,5,6,7,8,8-六氯-3a,4,7,7a-四氢-4,7-亚甲基-1H-聚-1-氧)4-丁酮
【机 构】
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深圳市检验检疫科学研究院,广东省深圳市易瑞生物技术有限公司
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目的：制备并鉴定环戊二烯类有机氯农药单克隆抗体。方法以环戊二烯类农药的特征部分为基础设计合成半抗原4-(4,5,6,7,8,8-六氯-3a,4,7,7a-四氢-4,7-亚甲基-1H-聚-1-氧)4-丁酮酸(CCD),并通过活泼酯法将其与载体蛋白BSA、OVA分别偶联制备免疫抗原CCD-BSA和包被抗原CCD-OVA；再经过动物免疫、细胞融合,筛选、克隆,得到1株能稳定分泌环戊二烯类农药抗体的单克隆细胞株。细胞株经扩大培养后,注射小鼠体内产生腹水,并将其用辛酸-硫酸铵和protein A柱子纯化出单克隆抗体。结果用间接ELISA方法测定其效价为2.5×104,亲和力Ka为6.7×1010L/mol；以β-硫丹为竞争物,采用间接竞争ELISA法建立标准曲线,测得其 IC50为16.2 ng/mL, LOD为2.1 ng/mL,定量检测线性范围为4.7~117.5 ng/mL,与其他5种结构类似物的交叉反应率高于10%。结论本研究成功获得了抗环戊二烯类农药单克隆抗体,该抗体可实现果蔬中环戊二烯类农药的多残留快速检测。
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