【摘 要】
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为了深入研究干酪乳杆菌Zhang在抗生素环境中适应性进化机制，构建yhaI基因敲除体系，并对突变体的耐药表型进行研究。运用PCR技术分别扩增yhaI基因的同源臂序列，构建带有内部缺失
【机 构】
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东北农业大学国家乳业工程技术研究中心黑龙江省绿色食品科学研究院; 内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室农业农村部奶制品加工重点实验室;
【基金项目】
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内蒙古青年科技英才支持计划(NJYT-17-B05)
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为了深入研究干酪乳杆菌Zhang在抗生素环境中适应性进化机制，构建yhaI基因敲除体系，并对突变体的耐药表型进行研究。运用PCR技术分别扩增yhaI基因的同源臂序列，构建带有内部缺失yhaI基因的敲除载体。采用Cre/lox基因重组系统，筛选双交换子L. casei Zhang-G-1200-yhaI::lox66-P32-cat-lox71，构建突变株L. casei Zhang-G-1200-yhaI。通过稀释法研究突变株的耐药表型。PCR和PCR产物测序验证，获得了yhaI基因缺陷的菌株。耐药表型结果表明，突变株在庆大霉素浓度为8 μg/mL和16 μg/mL时，浊度变为原始菌株的1/2；在庆大霉素浓度为16 μg/mL时，活菌数变为原始菌株的7/10。成功构建干酪乳杆菌Zhang的基因敲除体系，为研究干酪乳杆菌Zhang的基因功能提供了技术平台。
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