丹参对小鼠前成骨细胞的增殖分化的影响及其与细胞外信号调节激酶1/2信号通路的关系

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目的

观察丹参对于小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)的增殖、分化及成骨活性的影响,探讨与细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)细胞信号通路的关系。

方法

分别用75、150、300 mg/L浓度的丹参注射液干预MC3T3-E1前成骨细胞,并设对照组;用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活性的改变,培养21 d后茜素红染色法检测各组钙结节生成,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测各组骨钙素(BGP)、Runt相关基因2(Runx2)mRNA表达。设300 mg/L浓度的丹参干预组和对照组,Western blot法检测磷酸化ERK1/2蛋白的表达;用ERK1/2细胞信号通路抑制剂PD98059抑制ERK通路后,FQ-PCR检测成骨相关基因BGP、Runx2基因mRNA表达。

结果

与对照组比较,丹参干预组的MC3T3-E1前成骨细胞增殖活性明显增强,其中300 mg/L浓度组作用最强(P=0.006)。各浓度丹参干预组钙结节生成较对照组明显增多(P=0.000),分别为(11.40±2.30)、(21.00±2.24)、(35.60±1.52)个,对照组为(6.40±1.14)个。各浓度丹参干预组的BGP mRNA相对表达量(1.02±0.04、1.11±0.07、1.26±0.05)较对照组增加,其中150 mg/L组以及300 mg/L组差异有统计学意义(P=0.019,P=0.000);各浓度的丹参干预组的RunX2 mRNA相对表达量均有升高(1.38±0.25、2.28±0.13、2.48±0.06),并呈浓度依赖性,其中75 mg/L组差异有统计学意义(P=0.012),150 mg/L组及300 mg/L组差异有统计学意义(P=0.000)。经过丹参干预后(300 mg/L),磷酸化ERK1/2蛋白表达相对表达量为0.14±0.01,对照组为0.10±0.01,差异有统计学意义(P=0.014)。300 mg/L丹参组、300 mg/L丹参+PD98059组的BGPmRNA相对表达量分别为1.87±0.05、1.39±0.07,两组差异有统计学意义(P=0.000);Runx2表达的相对表达量分别为1.57±0.05、1.45±0.05,两组差异有统计学意义(P=0.000)。

结论

丹参能促进成骨细胞增殖分化,增进矿化作用,作用机制可能与激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的ERK1/2通路有关。

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