观察丹参对于小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)的增殖、分化及成骨活性的影响,探讨与细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)细胞信号通路的关系。
方法分别用75、150、300 mg/L浓度的丹参注射液干预MC3T3-E1前成骨细胞,并设对照组;用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活性的改变,培养21 d后茜素红染色法检测各组钙结节生成,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测各组骨钙素(BGP)、Runt相关基因2(Runx2)mRNA表达。设300 mg/L浓度的丹参干预组和对照组,Western blot法检测磷酸化ERK1/2蛋白的表达;用ERK1/2细胞信号通路抑制剂PD98059抑制ERK通路后,FQ-PCR检测成骨相关基因BGP、Runx2基因mRNA表达。
结果与对照组比较,丹参干预组的MC3T3-E1前成骨细胞增殖活性明显增强,其中300 mg/L浓度组作用最强(P=0.006)。各浓度丹参干预组钙结节生成较对照组明显增多(P=0.000),分别为(11.40±2.30)、(21.00±2.24)、(35.60±1.52)个,对照组为(6.40±1.14)个。各浓度丹参干预组的BGP mRNA相对表达量(1.02±0.04、1.11±0.07、1.26±0.05)较对照组增加,其中150 mg/L组以及300 mg/L组差异有统计学意义(P=0.019,P=0.000);各浓度的丹参干预组的RunX2 mRNA相对表达量均有升高(1.38±0.25、2.28±0.13、2.48±0.06),并呈浓度依赖性,其中75 mg/L组差异有统计学意义(P=0.012),150 mg/L组及300 mg/L组差异有统计学意义(P=0.000)。经过丹参干预后(300 mg/L),磷酸化ERK1/2蛋白表达相对表达量为0.14±0.01,对照组为0.10±0.01,差异有统计学意义(P=0.014)。300 mg/L丹参组、300 mg/L丹参+PD98059组的BGPmRNA相对表达量分别为1.87±0.05、1.39±0.07,两组差异有统计学意义(P=0.000);Runx2表达的相对表达量分别为1.57±0.05、1.45±0.05,两组差异有统计学意义(P=0.000)。
结论丹参能促进成骨细胞增殖分化,增进矿化作用,作用机制可能与激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的ERK1/2通路有关。