【摘 要】
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单碱基编辑器作为一种新型的CRISPR衍生工具,具有精准、高效及低脱靶等优点,现已应用于多种生物体中.单碱基编辑器经过不断改造目前已开发出多个版本.为探究不同版本碱基编辑
【机 构】
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西北农林科技大学,动物科技学院/陕西省动物遗传育种与繁殖重点实验室,杨凌712100
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单碱基编辑器作为一种新型的CRISPR衍生工具,具有精准、高效及低脱靶等优点,现已应用于多种生物体中.单碱基编辑器经过不断改造目前已开发出多个版本.为探究不同版本碱基编辑器在羊成纤维细胞上的编辑效率,本研究选定滩羊(Ovis aries)的绵羊多胎基因(fecundity booroola,FecB)和陕北白绒山羊(Capra hircus)的成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因,利用xCas9-ABE(腺嘌呤碱基编辑器,adenine base editor)、ABEmax4、xCas9-BE4和BE4max 4种新型单碱基编辑器,在滩羊和陕北白绒山羊胎儿成纤维细胞上进行单碱基定点编辑.结果显示,在绵羊细胞中,ABEmax编辑效率为46.15％,xCas9-ABE的编辑效率为38.46％,比普通编辑器ABE7.10分别高出27.4％与19.71％;在山羊细胞上,BE4max的编辑效率为92.86％,比普通编辑器BE3高56.5％,但xCas9-BE4未产生编辑.综上所述,本研究在羊胎儿成纤维细胞的碱基编辑应用中筛选出最优碱基编辑器,证明了高效定点编辑羊基因组的可行性,同时也为碱基编辑器应用于大型哺乳动物基因编辑提供技术支撑.
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