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本试验采用产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）K99菌毛基因完整编码框的特异性引物，以牛源大肠埃希菌 C83912基因组 DNA 为模板，扩增出大小为498 bp 的 ETEC K99菌毛基因完整编码框，克隆至pMD19-T 载体，阳性重组质粒 pMD19-T-K99经 PCR、双酶切鉴定和测序正确后，双酶切产物与 pET-32a （＋）载体连接，构建原核表达载体 pET-32a（＋）-K99，转化原核表达工程菌 BL21（DE3），阳性转化子经IPTG 诱导获高效表达，Western blot 证明原核表达的