【摘 要】
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猫杯状病毒(FCV)是引起猫科动物呼吸道疾病的重要病原之一,常用患病猫的口鼻眼拭子进行病原学诊断或病毒分离,病原微生物的混合感染给病毒的分离纯化带来困难.为了快速获得纯化的FCV,本试验将临床检测FCV和猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)混合病料处理后进行蚀斑纯化及条件优化.结果 显示:将细胞数约为7×105个/mL的F81细胞以每孔2 mL铺入6孔板中,待病毒吸附90 min后覆盖浓度为2％的第1层低熔点琼脂糖溶液,于37 ℃、5％ CO2培养箱倒置培养48 h,然后加入含0.01％中性红的第2层低熔点琼脂糖
【机 构】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京海淀100193;农业农村部兽用药物与诊断技术北京科学观测实验站,北京海淀100193;山东畜牧兽医职业学院,山东潍坊261061
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猫杯状病毒(FCV)是引起猫科动物呼吸道疾病的重要病原之一,常用患病猫的口鼻眼拭子进行病原学诊断或病毒分离,病原微生物的混合感染给病毒的分离纯化带来困难.为了快速获得纯化的FCV,本试验将临床检测FCV和猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)混合病料处理后进行蚀斑纯化及条件优化.结果 显示:将细胞数约为7×105个/mL的F81细胞以每孔2 mL铺入6孔板中,待病毒吸附90 min后覆盖浓度为2％的第1层低熔点琼脂糖溶液,于37 ℃、5％ CO2培养箱倒置培养48 h,然后加入含0.01％中性红的第2层低熔点琼脂糖溶液,于37℃、5％ C02培养箱培养,此条件所形成蚀斑的数量及大小均适合挑取.通过3次克隆纯化,挑取蚀斑进行了RT-PCR检测,成功从FCV和FHV-1的混合病毒中分离纯化到1株FCV.本试验首次建立的FCV蚀斑克隆方法,有助于FCV以及其他病毒的分离纯化,并为病毒的生物学特性试验提供科学依据.
其他文献
药敏试验(antibiotic susceptibility testing,AST)为兽医提供临床菌株对抗菌药物的敏感性等信息.然而,临床上为快速治疗患病动物,又碍于传统药敏试验的“漫长”的过程,兽医常以经验为导向诊断后直接开具处方,这成为细菌对抗菌药物产生耐药性的重要原因之一.随着耐药性的不断加剧,并危及公共卫生健康,缩短药敏试验的检测时长就显示出越来越重要的意义.现简要介绍稀释法、扩散法、E-test法等传统药敏试验检测方法,着重阐述新兴的快速药敏试验技术的原理、优缺点等,最后进行展望.
肠道微生态平衡对于肠-肝轴稳态至关重要,一方面肠道微生物影响着肝脏功能,另一方面肝脏亦塑造了肠道微生物组成.一旦肠道菌群紊乱打破肠-肝轴平衡,便可以造成肠黏膜屏障受损以及细菌性产物移位,进而加剧肝脏炎症及损伤,最终引发多种肝脏疾病.近年来,越来越多的研究成果表明,动物肝脏疾病和肠道微生物的关系密切.现基于肠-肝轴综述近年来肠道微生物影响动物肝脏疾病的相关机制研究进展及益生菌的治疗前景,以期为肝脏疾病的防治提供新的思路与干预手段,并为益生菌产品的开发和在畜牧生产中的应用提供理论依据.
本试验根据猪圆环病毒2型(PCV2) Cap蛋白表位,结合文献报道及软件预测,设计合成肽抗原;再用PCV2阳性血清进行筛选,优选出4条肽的混合肽段作为包被抗原;继而通过最适条件摸索,建立PCV2合成肽间接ELISA抗体检测方法,并从该方法的敏感性、特异性、重复性及其他试剂盒进行比对试验等关键性指标进行评估.结果 显示,间接ELISA的敏感性为95.0％,特异性为97.5％,批内变异系数在3.4％ ～7.2％,批间重复性变异系数在4.8％～8.6％.比对试验结果显示,本间接ELISA与PCV2 Cap蛋白包
本试验采用构建DNA混池和测序的方法,对西藏、青海341头牦牛TLR-4基因3\'-UTR区单核苷酸多态性(SNP)位点进行筛选,然后用DNAMAN 8.0软件进行序列对比分析,并通过TargetScan 7数据库预测牦牛TLR-4基因3\'-UTR区的微小RNAs (miRNAs)的可能靶定.结果 显示,牦牛TLR-4基因3\'-UTR区可能存在2个SNP位点,分别为A38UG和A382G,通过TargetScan7数据库在线预测到牦牛TLR-4基因3\'-UTR区共18个miRNAs可
为了建立一种快速鉴别检测猪源牛病毒性腹泻病毒(猪源BVDV)和猪瘟病毒(CSFV)的方法,根据GenBank中猪源BVDV和CSFV 5\'UTR基因序列分别设计合成特异性检测引物,经一步法双重RT-PCR反应条件的优化,建立了鉴别检测猪源BVDV和CSFV的一步法双重PCR方法.该方法对猪源BVDV、CSFV、猪源BVDV/CSFV混合物可分别扩增出185、342、185 bp和342 bp的特异性条带,检测PRRSV、PRV、PPV、PCV-2、PEDV、JEV、TGEV均为阴性,对猪源BVDV、
为了评价重组质粒pSMART2b-Etgam22抗柔嫩艾美耳球虫的保护效果,本试验用PCR扩增获得Etgam22基因后连接至pSMART2b载体以构建重组质粒pSMART2b-Etgam22,用Western Blot分析重组质粒pSMART2b-Etgam22在293T细胞中的表达情况,用重组质粒pSMART2b-Etgam22免疫雏鸡,并检测抗体水平和细胞因子分泌情况,随后用柔嫩艾美耳球虫卵囊感染免疫的雏鸡,观察死亡情况,检测体重变化、卵囊数量、盲肠病变,通过抗球虫指数评价pSMART2b-Etgam