目的 观察高浓度葡萄糖、高浓度游离脂肪酸对人皮肤成纤维细胞β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,探讨糖尿病皮肤溃疡难愈合的机制.方法 复苏正常成人皮肤成纤维细胞株,高糖改良伊格尔培养基(DMEM,25 mmol/L)培养基进行培养.首先,噻唑蓝(MTT)法筛选葡萄糖和游离脂肪酸对成纤维细胞最佳作用浓度:将细胞分为葡萄糖处理组和游离脂肪酸处理组,葡萄糖处理组含不同浓度葡萄糖(30、35、40、50、60、70 mmol/L),对照组不加葡萄糖；游离脂肪酸处理组含不同浓度软脂酸(100、200、400、600、800、1000 μmol/L),对照组仅为高糖DMEM培养基.以MTT法检测不同培养条件下成纤维细胞吸光度(A)值,结合细胞形态学观察,选择一个对细胞会造成一定损伤,但又不会使细胞大量死亡的浓度作为处理成纤维细胞的最佳浓度.其次,以最佳浓度培养成纤维细胞不同时间,Western blot法检测胞质内β-catenin蛋白的表达.取对数生长期的细胞分为3组:高浓度葡萄糖组(35 mmol/L)、高浓度游离脂肪酸组(200 μmol/L)、高浓度葡萄糖±高浓度游离脂肪酸(35 mmol/L ±200 μmol/L)联合组.于加入葡萄糖和软脂酸培养前(0 h)以及培养后4、8、12、16、20、24、48 h,收集各组细胞,采用Western blot法检测各组细胞3-catenin蛋白的表达.结果 (1)培养24 h后,成纤维细胞A值于葡萄糖浓度为35 mmol/L和游离脂肪酸为200 μmol/L时分别为(0.741 ±0.012、0.676±0.043),与对照组(0.934 ±0.007)比较开始下降(t值分别为1.70和2.48,P＜0.05),后随着葡萄糖和软脂酸浓度的增加,各组A值均减小(P＜0.05).(2)35 mmol/L葡萄糖组、200 μmol/L游离脂肪酸组及两者联合培养组细胞内3-catenin蛋白的表达分别于12、4、8h开始降低(t值分别为7.45、5.12、3.33,P＜0.05),48 h降至最低(P＜0.05).结论 高葡萄糖短期内能延缓高游离脂肪酸诱导的细胞β-catenin低表达,但在持续高糖存在的情况下,成纤维细胞β-catenin低表达程度比两者单独作用时更显著,高葡萄糖对高游离脂肪酸诱导的细胞β-catenin低表达呈现出先抑制后促进的作用。
高葡萄糖高游离脂肪酸对皮肤成纤维细胞β-连环蛋白表达的影响
【摘 要】
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目的 观察高浓度葡萄糖、高浓度游离脂肪酸对人皮肤成纤维细胞β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,探讨糖尿病皮肤溃疡难愈合的机制.方法 复苏正常成人皮肤成纤维细胞株,高糖改良伊格尔培养基(DMEM,25 mmol/L)培养基进行培养.首先,噻唑蓝(MTT)法筛选葡萄糖和游离脂肪酸对成纤维细胞最佳作用浓度:将细胞分为葡萄糖处理组和游离脂肪酸处理组,葡萄糖处理组含不同浓度葡萄糖(30、35、40
【机 构】
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【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2014年31期
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