【摘 要】
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目的 研究PU.1基因在慢性粒细胞性白血病(CML)患者骨髓细胞中表达下降的可能机制和意义.方法 采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测PU.1基因富含20个CpG位点的启动子区序列,了解正
【机 构】
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上海交通大学医学院附属新华医院血液内科,大连医科大学附属第二医院血液内科
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目的 研究PU.1基因在慢性粒细胞性白血病(CML)患者骨髓细胞中表达下降的可能机制和意义.方法 采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测PU.1基因富含20个CpG位点的启动子区序列,了解正常人、CML慢性期和急变期患者、经伊马替尼治疗后获得细胞遗传学完全缓解患者骨髓细胞以及CML急变细胞株K562中PU.1基因启动子区甲基化状态.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定正常对照、CML慢性期和急变期患者骨髓细胞以及CML急变细胞株K562中PU.1基因mRNA的表达水平.采用间接免疫荧光法和Western blot法检测CML慢性期和急变期患者骨髓细胞以及CML急变细胞株K562中PU.1蛋白的表达水平.结果 在CML慢性期和急变期患者骨髓细胞以及CML急变细胞株K562中,PU.1基因富含20个CpG位点的启动子区域存在异常高度甲基化状态(最多的克隆20个位点中有17个位点发生甲基化),并导致PU.1 mRNA和蛋白的表达水平下降.在正常对照者骨髓细胞中,PU.1基因启动子区域无甲基化改变,PU.1 mRNA和蛋白的表达水平也并未下降.经伊马替尼治疗后获得细胞遗传学完全缓解的CML患者骨髓细胞中仍存在PU.1基因启动子区域的高度甲基化状态.结论 CML患者骨髓细胞和K562细胞系中,PU.1基因的表观遗传学异常调控可能是导致PU.1基因表达下降的潜在机制.PU.1基因的异常高度甲基化参与了CML的发病过程,可能为CML的治疗提供新的靶点或预后标记.
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