【摘 要】
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背景复发难治性AML1-ETO融合基因阳性的急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者预后差。程序性细胞死亡蛋白-配体2（programmed cell death-ligand 2,PD-L2）是参与白血病免疫逃逸的重要分子，研究去甲基化药物对白血病细胞中PD-L2分子表达的影响对优化用药方案具重要意义。目的 分析AML1-ETO融合基因阳性的AML细胞中PDL2
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（82070149,81870109）； 北京市自然科学基金项目（7202191）；
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背景复发难治性AML1-ETO融合基因阳性的急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者预后差。程序性细胞死亡蛋白-配体2（programmed cell death-ligand 2,PD-L2）是参与白血病免疫逃逸的重要分子，研究去甲基化药物对白血病细胞中PD-L2分子表达的影响对优化用药方案具重要意义。目的 分析AML1-ETO融合基因阳性的AML细胞中PDL2分子启动子区甲基化水平及DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（decitabine,DAC）对其表达的影响。方法 以AML1-ETO融合基因阳性AML细胞系Kasumi-1以及两对AML1-ETO沉默（SKNO-1-PGK,SKNO-1-siA/E）或诱导细胞系（U937-MT,U937A/E,U937A/E+ZnSO4）为模型，采用终浓度为2.5μmol/L的DAC或0.1%的二甲基亚砜（对照）处理细胞72 h，其中Kasumi-1、SKNO-1-PGK细胞系设置0.25μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L 3个浓度梯度。采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测PD-L2 DNA启动子区特异性位点的甲基化水平；采用逆转录实时定量PCR技术检测PD-L2 mRNA表达水平。结果 Kasumi-1、SKNO-1-PGK细胞系中PD-L2 DNA启动子区呈高甲基化水平，DAC处理后该区域DNA甲基化水平下降（为别为94.3%vs 90.7%,88.6%vs 83.6%）。2.5μmol/L DAC处理后的Kasumi-1、SKNO-1-PGK、SKNO-1-siA/E、U937A/E细胞中PD-L2 mRNA的相对表达水平均显著高于对照组细胞（P均＜0.05）；特别是DAC处理后，沉默AML1-ETO基因的细胞系中PD-L2表达增加（SKNO-1-siA/E与SKNO-1-PGK相比上升35.80%,P=0.031），过表达AML1-ETO基因的细胞系中PD-L2表达减少（U937A/E+ZnSO4与U937A/E相比下降95.51%,P=0.036）。经DAC处理后的Kasumi-1、SKNO-1-PGK细胞系中，PD-L2 mRNA表达呈浓度依赖性递增（Kasumi-1:r~2=0.87;SKNO-1-PGK:r~2=0.93,P均＜0.05）。结论 AML1-ETO阳性AML细胞中PD-L2基因的表达受DNA甲基化调控，AML1-ETO可能参与了对PD-L2基因表达的抑制。
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