利用RNA干扰(RNAi)技术降低人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的表达，抑制其活性，观察其对小儿肝母细胞瘤细胞的增殖和凋亡影响。
方法构建针对hTERT基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体——pLXSN-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)-U6-siTERT，采用聚合酶链反应(PCR)法扩增hTERT-siRNA、EGFP、U6＋27的DNA片段，反转录病毒表达载体pLXSN-EGFP-U6-siTERT的构建及酶切鉴定，制备靶向hTERT的重组反转录病毒；用重组反转录病毒感染HepG2小儿肝母细胞瘤细胞，以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)法检测端粒酶活性变化；流式细胞仪检测细胞凋亡率；噻唑蓝(MTT)法检测肿瘤细胞生长抑制。
结果成功制备出hTERT-siRNA反转录病毒表达载体；对照组端粒酶活性为2 143.06±198.69，重组病毒感染作用24、48、72 h后，端粒酶活性分别为1 632.02±116.28、899.38±126.11和321.25±25.25，与感染前比较，分别下降23.84%、58.03%和85.01%，各时间组间差异有统计学意义(P＝0.046、0.024和0.008)。流式细胞仪检测结果显示：不同滴度的重组病毒感染实验组与对照组的细胞凋亡率比较差异有统计学意义，并呈浓度依赖关系，随着滴度的增加细胞凋亡率增加。1×105菌落形成单位(CFU)重组病毒感染24 h后，其凋亡率达29.05%。MTT结果显示，感染后24 h细胞凋亡率为29.05%；重组病毒感染后24 h，肿瘤细胞开始明显死亡，随着病毒滴度的提高和作用时间延长，细胞死亡亦逐渐加重，病毒滴度为6.0×105 CFU时，感染24、48、72 h后，MTT结果为0.29±0.14、0.20±0.13和0.18±0.11，3.0×105 CFU时，感染24、48、72 h后，MTT结果为0.32±0.11、0.26±0.12和0.25±0.10，1.0×105 CFU时，感染24、48、72 h后，MTT结果为0.33±0.12、0.26±0.13和0.26±0.12，1.0×104 CFU时，感染24、48、72 h后，MTT结果为0.43±0.14、0.35±0.10和0.33±0.15，1.0×103 CFU时，感染24、48、72 h后，MTT结果为0.52±0.11、0.44±0.13和0.44±0.10，1.0×102 CFU时，感染24、48、72 h后，MTT结果为0.65±0.13、0.61±0.15和0.60±0.16，阴性对照组细胞在24、48、72 h后，MTT结果为0.69±0.11、1.01±0.14和2.98±0.16。显示存在量效和时效关系(P＝0.037、0.034、0.028)。
结论hTERT-siRNA能特异性抑制hTERT基因表达，端粒酶活性下降，抑制肝母细胞瘤细胞增殖。