【摘 要】
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目的 构建表达抗CD20scFv/CD80/CD28/ζ重组基因修饰T细胞,体外观察其特异性清除CD20+淋巴瘤细胞的能力,为肿瘤的过继免疫治疗提供新思路.方法 采用DNA重组技术将pBULLET上的
【机 构】
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温州医学院附属第一医院,美国Bio-Rad生物技术公司临床实验室
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目的 构建表达抗CD20scFv/CD80/CD28/ζ重组基因修饰T细胞,体外观察其特异性清除CD20+淋巴瘤细胞的能力,为肿瘤的过继免疫治疗提供新思路.方法 采用DNA重组技术将pBULLET上的CD28-ζ cDNA插入到已含有抗CD20scFv/CD80的真核表达载体pLNCX质粒上,转染PA317包装细胞,挑取高滴度的包装细胞收获病毒,用收获的病毒感染刺激分裂的人外周血T淋巴细胞,经G418筛选1周后与CD20+淋巴瘤细胞株Daudi、Raji在体外共同培养,用非放射性的细胞杀伤试剂盒和ELISA检测试剂盒分别检测T细胞的抗原特异性杀伤和细胞因子分泌的功能.结果 酶切及测序鉴定均证实pLNCX/抗CD20scFv/CD80/CD28/ζ构建成功,重组基因修饰的T细胞能在体外杀伤CD20+淋巴瘤细胞株Daudi、Raji,而对CD20-细胞株K562无杀伤作用,同时CD20+靶细胞组上清液中IL-2和IFN-γ水平与CD20-组相比明显升高.结论 重组基因修饰的CD20靶向性T细胞构建成功.该T细胞在体外能特异性杀伤CD20+淋巴瘤细胞株.
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