【摘 要】
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目的:探讨6聚组氨酸序列与葡激酶基因序列融合表达及其表达产物的纯化方法.方法:将葡激酶的cDNA序列连入pET-29b质粒,转入E.coli BL21(DE3)进行表达.应用镍金属离子螯合层析
【机 构】
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天津大学化工学院生物工程系,吉林大学中日联谊医院妇产科
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目的:探讨6聚组氨酸序列与葡激酶基因序列融合表达及其表达产物的纯化方法.方法:将葡激酶的cDNA序列连入pET-29b质粒,转入E.coli BL21(DE3)进行表达.应用镍金属离子螯合层析及凝胶过滤层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定.结果:6聚组氨酸与葡激酶的可溶性融合蛋白在BL21(DE3)中的表达量约占菌体可溶性蛋白总量的25%;螯合层析纯化后其纯度可达90%以上;再应用Sephacryl S-200HR可使其纯度提高到98%以上;测得其比活性为5.0×10 4
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