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目的建立高效的人皮肤成纤维细胞的原代培养和体外连续培养体系，为组织工程皮肤真皮的构建提供充足的种子细胞。方法取临床无菌切除的幼儿包皮，利用Ⅱ型胶原酶分离表皮和真皮，再用胰蛋白酶消化，剪碎真皮，接种于培养瓶，加少许含10％胎牛血清的高糖-DMEM培养液进行培养，次日补加培养液。原代长满后，进行传代，并对所培养的细胞进行形态学观察及免疫荧光鉴定。结果接种次日倒置镜下可见有长梭形细胞迁出、生长，3～4d进行传代，传代后3d长满，可长期传代。细胞免疫荧光检测，Vimentin表达阳性。结论该方法可快速高效获得构建