【摘 要】
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目的构建人白细胞介素-31(hIL-31)基因真核表达载体并将其转染到HaCaT细胞,观察其对HaCaT细胞炎症因子分泌的影响。方法分离人外周血单核细胞,加入终浓度为20 nmol/L的豆蔻佛
【机 构】
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安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室
【基金项目】
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安徽省重点实验室优秀中青年科研带头人专项基金;安徽医科大学博士基金
论文部分内容阅读
目的构建人白细胞介素-31(hIL-31)基因真核表达载体并将其转染到HaCaT细胞,观察其对HaCaT细胞炎症因子分泌的影响。方法分离人外周血单核细胞,加入终浓度为20 nmol/L的豆蔻佛波醇乙酯(PMA),继续培养24 h收集细胞。RT-PCR克隆hIL-31 cDNA,并将其克隆到真核表达载体pSecTag2/Hygro B上。将构建成功的重组体转染至HaCaT细胞,用Western blot分析hIL-31在细胞中的表达以及RT-PCR方法分析其对IL-6、TNFα表达的影响。结果经双酶切、测序及Blast分析鉴定,我们成功获得hIL-31基因cDNA全长序列和pSecTag2/HygroB-IL-31重组体。转染至HaCaT细胞的外源性hIL-31可以促进IL-6、TNFα的表达。结论 hIL-31可以通过自分泌的方式促进HaCaT细胞炎性相关细胞因子的表达。
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