细胞色素P450nor在大肠杆菌中的克隆表达及分离纯化

来源 :生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：zhoushucheng0533

【摘要】

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研究改造了原有的未能高效表达的重组表达载体pRSET-p450nor,通过PCR方法,去除了P450nor起始密码子ATG上游的59个碱基序列。将真菌细胞色素P450nor基因首先克隆至克隆载体pBl

【作者】

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陈舒丽刘德立蔡朝晖刘汉才罗德生

【机构】

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咸宁学院基础医学院,华中师范大学生命科学学院,咸宁学院化学与生命科学学院

【出处】

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生物学杂志

【发表日期】

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2010年4期

【关键词】

：

细胞色素P450nor 克隆表达大肠杆菌 cytochrome P450nor cloning over-expression purification

【基金项目】

：

国家自然科学基金（No.30170011）

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研究改造了原有的未能高效表达的重组表达载体pRSET-p450nor,通过PCR方法,去除了P450nor起始密码子ATG上游的59个碱基序列。将真菌细胞色素P450nor基因首先克隆至克隆载体pBluescript II上,然后亚克隆到高效表达载体pET-28上,得到了重组表达载体pET-p450nor。该基因在30℃、0.1mM IPTG诱导下在大肠杆菌中获得高效表达融合蛋白His-P450nor。SDS-PAGE蛋白电泳表明在45kD处出现强特异性带。将大量表达的重组蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化

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