【摘 要】
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目的:建立HBV基因分型高通量液相芯片检测技术,并探讨其应用价值。方法:对GenBank中收录的明确分型的HBV基因序列进行分析,选择preS2-S区设计引物和A、B、C和D型特异性探针。
【机 构】
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第四军医大学药学院药物基因组学教研室全军基因诊断技术研究所;
【基金项目】
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国家“十一五”重大传染病专项(2009ZX10004-311);国家重点基础研究发展规划(973)项目(2010CB933900);西安市科技计划(SF09027)
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目的:建立HBV基因分型高通量液相芯片检测技术,并探讨其应用价值。方法:对GenBank中收录的明确分型的HBV基因序列进行分析,选择preS2-S区设计引物和A、B、C和D型特异性探针。与荧光编码微球偶联的特异型探针与一条引物生物素标记的PCR产物直接杂交反应,然后结合亲和素标记的藻红蛋白,用流式检测仪(Bio-Plex 200)检测荧光信号。检测182份阳性乙肝患者血清DNA,其中35份样品检测结果与测序法比较。用B、C型质粒DNA倍比稀释及混合样品检测灵敏度来评估该方法。结果:建立了HBV基因分型的快速高通量液相芯片检测方法。182份患者血清检测结果为:B型占24.2%(44/182),C型占71.4%(130/182),D型为6.6%(12/182),BC混合型4.4%(8/182)。其中35份样本与测序法比较,除3份混合型测序法未检出外,其它32例结果均相同。本方法的灵敏度检测下线为1×103copies/mL。结论:应用悬液芯片技术进行乙肝病毒的基因分型分析,具有较好的特异性和较高的灵敏度,并有简便、灵活和高通量等优势。该检测系统不仅在科研中有广泛的前景,也有望成为临床推广的多重分子诊断和基因分型的新方法。
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