内源性CRF对小鼠肠系膜淋巴结树突状细胞的生物表型的影响

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:khalista6
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目的 

检测小鼠肠系膜淋巴结树突状细胞(MLNDC)上促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)及其受体CRFR1、CRFR2的表达,探讨CRF及其受体对MLNDC的表型改变的影响。

方法

采用磁珠分选技术分离C57BL/6小鼠的MLNDC,以流式标记CD11c鉴定DC分选纯度,获得高纯度MLNDC后,RT-PCR检测其CRF、CRFR1与CRFR2的转录水平,免疫荧光双染法明确MLNDC表面CRFR1及CRFR2的表达。将MLNDC体外培养,予以CRF受体相应拮抗剂干预,流式细胞术观察DC表面分子变化。

结果 

流式细胞术检测显示经磁珠分选后,CD11c标记的树突状细胞阳性率为(80.12±6.34)%,锥虫蓝染色显示细胞活性>90%,MLNDC存在CRF、CRFR1与CRFR2 mRNA的表达,免疫荧光提示其表面存在CRFR1及CRFR2的表达,CRFR1拮抗剂Antalarmin(10 nmol/L)可以下调MLNDC表面共刺激分子CD86,而CRFR2拮抗剂Astressin 2B(10 nmol/L)可以上调MLNDC表面共刺激分子CD86。

结论 

体外分离的C57BL/6小鼠MLNDC自身存在CRF及其受体CRFR1和CRFR2的表达,并且该两种受体对MLNDC表型具有相反的作用。

其他文献
目的 构建肺炎链球菌ciaH基因敲除(ΔciaH)突变株,了解肺炎链球菌二元信号系统CiaH/CiaR中ciaH基因与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性。方法 采用PCR扩增肺炎链球菌ATCC6306株ciaH基因片段,T-A克隆后测序。构建用于敲除ciaH基因的自杀质粒pEVP3ciaH,CaCl2法将其转化入肺炎链球菌ATCC6306株,通过同源重组、插入失活及氯霉素筛选获得肺炎链球菌ATCC63