【摘 要】
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目的:分离与鉴定弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清中的外泌体探索外泌体中mRNA和长非编码RNA(lncRNA)的表达特征.方法:采用ExoRNeasy试剂盒从8例DLBCL患者中分离出血清外泌体,并通
【机 构】
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佛山科学技术学院 广东 佛山 528000
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目的:分离与鉴定弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清中的外泌体探索外泌体中mRNA和长非编码RNA(lncRNA)的表达特征.方法:采用ExoRNeasy试剂盒从8例DLBCL患者中分离出血清外泌体,并通过电子显微镜,粒度分析和表面标志物检测对外泌体进行鉴定.提取RNA后,使用第二代测序技术进行转录组测序以分析mRNA和lncRNA表达谱,并使用RT-PCR技术验证测序结果.结果:在电子显微镜下观察其形貌、粒径,并检测表面标记.具有膜结构的颗粒尺寸均匀,直径为40-130nm,形状为杯形,CD63和CD81的阳性率大于70％.它们都符合外泌体的特征.已确可外泌体中可以从DLBCL患者血清分离出.然后使用RNA-Seq技术检测外泌体中的mRNA和lncRNA表达谱,共检测出44562个mRNA,其中铁蛋白轻链NM000146.3(FTL)、NM000993.4(RPL31)和NM000975.3(RPL11)表达丰度高.总共检测到27809个lncRNA分子,选择5个lncRNA进一步PCR检测,阳性表达率为100％,表明RNA-seq结果基本可靠.结论:通过形态,粒度和特征蛋白的分析证实了DLBCL血清外泌体的存在.可以在其中检测到大量的mRNA和lncRNA分子,这为深入探索DLBCL外泌体中RNA分子的临床应用提供了基础数据.
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