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摘要：目的：香兰素在日常生活中用途非常广，如在日化、食品，烟草工业，临床药物的制造等。目前国内还没有相关报道香兰素对人生殖系统有影响。本实验探讨香兰素对男性精子活力的影响。方法： 将香兰素分成不同的浓度组：1X10-2MMOL/ML ，1X10-3MMOL/ML ，1X10-4MMOL/ML， 1X10-5MMOL/ML， 1X10-6MMOL/ML，1X10-8MMOL/ML加入符合WHO第四版规定的正常的人精液中。利用计算机辅助精子分析仪，检测与比较对精子的活力影响。结果：随着香兰素浓度的逐减对精子活力的影响越来越小，浓度为1X10-6MMOL/ML，精子活力变化最小，与生理盐水，灭菌水比较无显著差异，通过数学统计分析无统计学意义。结论： 香兰素是一种用途广泛相对安全的食品添加剂，在国家规定标准范围内使用对人精子活力无影响。对人类的其他影响还有待探讨。
关键词：香兰素 食品添加剂 人精子活力
中图分类号 ：R715.5 文献标识码：A
ABSTRACT：Objective： Vanillin is used very widely. For example it is used in daily chemical production， food， the tobacco industry and manufacture of clinical medicine. So far， there are no relevant reports about the affect of vanillin on human reproductive system in China. This test is to discuss the influences of vanillin on the male sperm vitality. Methods： The concentration of vanillin is divided into different groups： 1X10-3MMOL/ML ，1X10-4MMOL/ML， 1X10-5MMOL/ML， 1X10-6MMOL/ML，1X10-8MMOL/ML. And then they were added to the normal semen. By computer assisted sperm analyzer， testing and comparison their influence on sperm vitality. Results： As the vanillin concentration decreases， its effect is more and more smaller on sperm motility. The change is minimal on the concentration of 1X10-6MMOL/ML. And there are no significant differences compared with normal saline and water sterilization. Through mathematical statistical analysis， there is no statistical significance. Conclusions： Vanillin is a kind of relative safety and used widely food additive. There is no influence sperm motility if it was used within the scope of the provisions of the state standard. But the other more effects on human remains to be explored.
KeyWords ：Vanillin food additives human sperm motility
香兰素的用途非常广泛，可以作为香原料，定香剂或矫味剂应用于食品，是一种常用的食品添加剂，常用于饮料，糕点，糖果，饼干，炒货和面包中【1-3】；用于工业，作锌电镀的活性剂、镀锌槽的增白剂、亚麻子油的氧化助剂及杀虫剂的引诱剂【4】；还可以用于制烟中防止吸烟引起的嘴唇干燥【5】；另，香兰素可以作为一种催熟剂、维生素B2的增溶剂和甲基异丁烯聚合的催化剂。香兰素也是重要的化学中间体，用作药物中生产L_多巴和L-甲基多巴、罂粟碱的基础原料。还是抗肿瘤药吉非替尼的中间体，以异香兰素为原料合成【6】乙基香兰素、香草酸乙酯、姜油酮等都是重要的香料。香兰素分为甲基香兰素（vanillin）和乙基香兰素。甲基香兰素化学名3-甲氧基-4-羟基苯甲醛，即通常所称香兰素，白色或微黄色结晶，具有香荚兰香气及浓郁的奶香，为香料工业中最大的品种，是人们普遍喜爱的奶油香草香精的主要成份。目前国内还没有相关报道说香兰素对人体有害。腙类化合物已经被证实具有一定的抗细菌【7】 、缓解痉挛，抗真菌、抗疟疾，消炎， 和肺结核的功效[8]。此外.腙类化合物已经用于其他不同的领域，如除草剂、杀虫剂il2-- 13，以及调节农作物生长14：等。不可过量，据欧盟专家委员会2000年2月24日报导，大剂量可导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至损伤肝、肾等【9】。香兰素用途如此之广，又是食品添加剂与人息息相关，近年来，不孕不育率逐年上升，未有报道香兰素对男性生殖系统有何影响，所以本实验用来探讨一下其对人精子活力的影响。
1材料与方法
1.1标本来自兰州大学第一附属医院生殖专科医院2014年11月-2015年1月，于本中心行辅助生殖技术助孕，因女性因素不孕的夫妇，以男性为研究对象。标本来源于WHO制定的正常参考范围的精液。其标准：男性近期无严重的生殖系统感染；无激素类药物服用病史；无外伤及遗传性家族病史；染色体为正常型：46，XY；近半年内未受到X线等的辐射影响，体检未发现生殖系统异常，无精索静脉曲张。所取标本的患者实验前均签署知情同意书，并通过伦理委员会的批准。根据世界卫生组织（WHO）制定的精液标本的正常参考范围：（1）：颜色灰白、精液量≥2.0 ml ；（2） pH≥7.2；（3） 密度≥20×106/ml； （4）活力：a级+b级≥50%（且a级≥25%） 精液采集后半小时加入EP管中，放36.8 ℃的恒温箱中液化30 min。然后将每份标本轻柔、 缓慢吹打、混匀。 1.2 方法
将每份精液标本放入36.8℃的恒温水浴锅中液化30分钟，之后取出用移液枪轻柔、吹打均匀。将浓度为2mmol/ml的香兰素加灭菌水分别稀释至浓度为：0.2mmol/ml；0.02mmol/ml；0.002mmol/ml；1x10-4mmol/ml；1x10-5mol/ml；1x10-6mol/ml；1x10-8mmol/ml。首先，初步筛选符合：已液化（精液拉丝长度<2mm）；浓度>20x106 /ml；A级>25%的精液标本。各浓度取10份患者的精液进行试验。从充分混匀的每份精液标本中，各取90μl精液然后分别加入3个EP管中，分别标为：1`，1``，1```。在加入香兰素的时间分别为：0分钟，10分钟，30分钟，60分钟，90分钟各检测一次精子的活力，并记录统计。用折线图统计各浓度A级精子活力及A+B级活力均值的变化。其次，通过折线图比较看出香兰素浓度为1x10-6mol/ml时A级精子活力变化最小。再取6份精液标本分两组，其中一组精液标本为：浓度1x10-6mol/ml的香兰素与灭菌水相比较对精子活力的影响；另一组为浓度1x10-6mol/ml的香兰素与生理盐水的比较。
2 结果
采用折线图及SPSS21.0统计软件分析数据，以均数±标准差表示香兰素实验组和生理盐水对照组的结果。
各组之间比较结果如下：
3 讨论
香兰素是一种用途广泛的食品添加剂，同时也是重要的工业原料和药物中间体。最近有报道称有几个品牌的婴儿一段奶粉添加了国家禁止的香兰素，大量使用这种香精会使婴幼儿肝肾造成损伤。本实验通过浓度为1x10-6mmol/ml时的香兰素，对精液的影响与生理盐水、灭菌水，对精子活力的影响的比较发现：香兰素对精子活力灭菌水，生理盐水对精子A级活力的影响没有显著性差异。另，香兰素具有很好的抗辐射抗损伤作用【10】，对人体是有益的。人精子活力的降低受到外界很多方面的影响，有食品和环境等多种因素。食品中的添加剂种类很多，引起活力降低，形态改变的添加剂还有待于去进一步的研究和探索；减少因男性方面引起的不孕不育，从而达到优生优育的研究也需进一步的跟进。香兰素对人体的其他方面的影响还要在以后的临床实践中继续探求。
参考文献 ：
[1] 周斌， 张承明， 任洪涛， 等. 香荚兰果荚中香兰素的CG-M 分析[J].香料香精化妆品， 2007， （8）： 1-4.
Zhou B， Zhang CM， Ren HT， et al . Analysi s of Vanil linin Vanilla Bean by GC-MS [J]. Flavour Frag Cosmet， 2007， （8）： 1-4.
[2] 魏文德， 有机化工原料大全[M].北京： 化学工业出版社， 1996.Wei WD. Encyclopedia of Organic chemical -Industry Materials [M]. Beijing： Chemical Industry Press， 1996.
[3] 杨俊， 仿香荚兰香味[J]. 化学世界， 1991， 32（8）： 3 79
[4] 陈秀清，杨润贤，香兰素合成方法研究探讨[J] 广州化工 2010，38（6）：40-69
[5] 殷延齐 ， 薄云川， 丁超， 等。 香兰素对卷烟主流烟气中挥发性成分的影响[J].食品安全质量检测学报， 2014，5（6）：1841-1845
[6] 孙 键，李娇毅，张喜全，等。抗肿瘤药吉非替尼的合成方法研究[J]化学研究与应用，2013.25（8）：1180-1184.
[7] NORA H A， AL—SHA’ALAN. Antimicrobial activity and spectral，magnetic and thermal studies of some transition metal complexes of a schiff base hydrazone containing a quinoline moiety[J].Molecules，2007，12（5）：1080—1091
[8]邹怀波，周 蓉 ，梁 辉，等。两种香兰素腙类化合物的合成及抑菌活性初步研究[J]湖北农业科学，2011，50（7）：1387-1389。
[9] 田其英.酸奶的研究进展[J].食品与发酵科技，2013，49（1）：91-94
[10]郑 红 汪思应 严雨倩，等，香兰素衍生物对辐射损伤细胞保护作用的初步研究 [J]辐射防护，2008，28（4）：226-230.
关键词：香兰素 食品添加剂 人精子活力
中图分类号 ：R715.5 文献标识码：A
ABSTRACT：Objective： Vanillin is used very widely. For example it is used in daily chemical production， food， the tobacco industry and manufacture of clinical medicine. So far， there are no relevant reports about the affect of vanillin on human reproductive system in China. This test is to discuss the influences of vanillin on the male sperm vitality. Methods： The concentration of vanillin is divided into different groups： 1X10-3MMOL/ML ，1X10-4MMOL/ML， 1X10-5MMOL/ML， 1X10-6MMOL/ML，1X10-8MMOL/ML. And then they were added to the normal semen. By computer assisted sperm analyzer， testing and comparison their influence on sperm vitality. Results： As the vanillin concentration decreases， its effect is more and more smaller on sperm motility. The change is minimal on the concentration of 1X10-6MMOL/ML. And there are no significant differences compared with normal saline and water sterilization. Through mathematical statistical analysis， there is no statistical significance. Conclusions： Vanillin is a kind of relative safety and used widely food additive. There is no influence sperm motility if it was used within the scope of the provisions of the state standard. But the other more effects on human remains to be explored.
KeyWords ：Vanillin food additives human sperm motility
香兰素的用途非常广泛，可以作为香原料，定香剂或矫味剂应用于食品，是一种常用的食品添加剂，常用于饮料，糕点，糖果，饼干，炒货和面包中【1-3】；用于工业，作锌电镀的活性剂、镀锌槽的增白剂、亚麻子油的氧化助剂及杀虫剂的引诱剂【4】；还可以用于制烟中防止吸烟引起的嘴唇干燥【5】；另，香兰素可以作为一种催熟剂、维生素B2的增溶剂和甲基异丁烯聚合的催化剂。香兰素也是重要的化学中间体，用作药物中生产L_多巴和L-甲基多巴、罂粟碱的基础原料。还是抗肿瘤药吉非替尼的中间体，以异香兰素为原料合成【6】乙基香兰素、香草酸乙酯、姜油酮等都是重要的香料。香兰素分为甲基香兰素（vanillin）和乙基香兰素。甲基香兰素化学名3-甲氧基-4-羟基苯甲醛，即通常所称香兰素，白色或微黄色结晶，具有香荚兰香气及浓郁的奶香，为香料工业中最大的品种，是人们普遍喜爱的奶油香草香精的主要成份。目前国内还没有相关报道说香兰素对人体有害。腙类化合物已经被证实具有一定的抗细菌【7】 、缓解痉挛，抗真菌、抗疟疾，消炎， 和肺结核的功效[8]。此外.腙类化合物已经用于其他不同的领域，如除草剂、杀虫剂il2-- 13，以及调节农作物生长14：等。不可过量，据欧盟专家委员会2000年2月24日报导，大剂量可导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至损伤肝、肾等【9】。香兰素用途如此之广，又是食品添加剂与人息息相关，近年来，不孕不育率逐年上升，未有报道香兰素对男性生殖系统有何影响，所以本实验用来探讨一下其对人精子活力的影响。
1材料与方法
1.1标本来自兰州大学第一附属医院生殖专科医院2014年11月-2015年1月，于本中心行辅助生殖技术助孕，因女性因素不孕的夫妇，以男性为研究对象。标本来源于WHO制定的正常参考范围的精液。其标准：男性近期无严重的生殖系统感染；无激素类药物服用病史；无外伤及遗传性家族病史；染色体为正常型：46，XY；近半年内未受到X线等的辐射影响，体检未发现生殖系统异常，无精索静脉曲张。所取标本的患者实验前均签署知情同意书，并通过伦理委员会的批准。根据世界卫生组织（WHO）制定的精液标本的正常参考范围：（1）：颜色灰白、精液量≥2.0 ml ；（2） pH≥7.2；（3） 密度≥20×106/ml； （4）活力：a级+b级≥50%（且a级≥25%） 精液采集后半小时加入EP管中，放36.8 ℃的恒温箱中液化30 min。然后将每份标本轻柔、 缓慢吹打、混匀。 1.2 方法
将每份精液标本放入36.8℃的恒温水浴锅中液化30分钟，之后取出用移液枪轻柔、吹打均匀。将浓度为2mmol/ml的香兰素加灭菌水分别稀释至浓度为：0.2mmol/ml；0.02mmol/ml；0.002mmol/ml；1x10-4mmol/ml；1x10-5mol/ml；1x10-6mol/ml；1x10-8mmol/ml。首先，初步筛选符合：已液化（精液拉丝长度<2mm）；浓度>20x106 /ml；A级>25%的精液标本。各浓度取10份患者的精液进行试验。从充分混匀的每份精液标本中，各取90μl精液然后分别加入3个EP管中，分别标为：1`，1``，1```。在加入香兰素的时间分别为：0分钟，10分钟，30分钟，60分钟，90分钟各检测一次精子的活力，并记录统计。用折线图统计各浓度A级精子活力及A+B级活力均值的变化。其次，通过折线图比较看出香兰素浓度为1x10-6mol/ml时A级精子活力变化最小。再取6份精液标本分两组，其中一组精液标本为：浓度1x10-6mol/ml的香兰素与灭菌水相比较对精子活力的影响；另一组为浓度1x10-6mol/ml的香兰素与生理盐水的比较。
2 结果
采用折线图及SPSS21.0统计软件分析数据，以均数±标准差表示香兰素实验组和生理盐水对照组的结果。
各组之间比较结果如下：
3 讨论
香兰素是一种用途广泛的食品添加剂，同时也是重要的工业原料和药物中间体。最近有报道称有几个品牌的婴儿一段奶粉添加了国家禁止的香兰素，大量使用这种香精会使婴幼儿肝肾造成损伤。本实验通过浓度为1x10-6mmol/ml时的香兰素，对精液的影响与生理盐水、灭菌水，对精子活力的影响的比较发现：香兰素对精子活力灭菌水，生理盐水对精子A级活力的影响没有显著性差异。另，香兰素具有很好的抗辐射抗损伤作用【10】，对人体是有益的。人精子活力的降低受到外界很多方面的影响，有食品和环境等多种因素。食品中的添加剂种类很多，引起活力降低，形态改变的添加剂还有待于去进一步的研究和探索；减少因男性方面引起的不孕不育，从而达到优生优育的研究也需进一步的跟进。香兰素对人体的其他方面的影响还要在以后的临床实践中继续探求。
参考文献 ：
[1] 周斌， 张承明， 任洪涛， 等. 香荚兰果荚中香兰素的CG-M 分析[J].香料香精化妆品， 2007， （8）： 1-4.
Zhou B， Zhang CM， Ren HT， et al . Analysi s of Vanil linin Vanilla Bean by GC-MS [J]. Flavour Frag Cosmet， 2007， （8）： 1-4.
[2] 魏文德， 有机化工原料大全[M].北京： 化学工业出版社， 1996.Wei WD. Encyclopedia of Organic chemical -Industry Materials [M]. Beijing： Chemical Industry Press， 1996.
[3] 杨俊， 仿香荚兰香味[J]. 化学世界， 1991， 32（8）： 3 79
[4] 陈秀清，杨润贤，香兰素合成方法研究探讨[J] 广州化工 2010，38（6）：40-69
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[6] 孙 键，李娇毅，张喜全，等。抗肿瘤药吉非替尼的合成方法研究[J]化学研究与应用，2013.25（8）：1180-1184.
[7] NORA H A， AL—SHA’ALAN. Antimicrobial activity and spectral，magnetic and thermal studies of some transition metal complexes of a schiff base hydrazone containing a quinoline moiety[J].Molecules，2007，12（5）：1080—1091
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[9] 田其英.酸奶的研究进展[J].食品与发酵科技，2013，49（1）：91-94
[10]郑 红 汪思应 严雨倩，等，香兰素衍生物对辐射损伤细胞保护作用的初步研究 [J]辐射防护，2008，28（4）：226-230.