高效制备重组人α-突触核蛋白原纤维方法的建立

来源 :生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：kcl

【摘要】

：

通过设计PCR引物,从pcDNA3.1-α-syn载体中扩增人α-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至PGEX-5X-1载体中,成功构建了人α-突触核蛋白高效原核表达载体pGEX-5X-1-syn。转化BL

【作者】

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罗海玉吴正存马开利

【机构】

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中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心,中国医学科学院北京协和医学院医学灵长类研究中心&,神经科学中心

【出处】

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生物学杂志

【发表日期】

：

2020年2期

【关键词】

：

帕金森氏病 Α-突触核蛋白原纤维 PGEX-5X-1载体 GST Parkinson′s diseaseα-synucleinfibrilsPGEX-5X-1

【基金项目】

：

国家自然科学基金(81301073,81571254),国家科技重大专项(2016ZX08011007-003),云南省应用基础项目(2016FA032),中央高校基本科研业务费(2015PT310002、33320140191、3332016116、2016ZX310179-1、2017310040),中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2016-I2M-2-001、2016-I2M-1-00

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通过设计PCR引物,从pcDNA3.1-α-syn载体中扩增人α-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至PGEX-5X-1载体中,成功构建了人α-突触核蛋白高效原核表达载体pGEX-5X-1-syn。转化BL21菌株后进行IPTG诱导,通过对诱导剂浓度、诱导时间和温度、纯化方法和原纤维培养条件的优化,获取了重组人α-突触核蛋白原纤维,采用硫黄素T染色和透射电镜方法确认原纤维的制备情况。结果发现,经终浓度为1.0 mmol/L的IPTG,37℃条件下诱导3 h,人α-突触核蛋白得到大量表达。采用GST融合蛋

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