【摘 要】
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目的：构建弗氏志贺菌cZp8基因的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达后，纯化带T7标签的ClpB蛋白。方法与结果：PCR扩增得到线性化表达载体pET24a与2574bp的c加曰基因片段，利用不依赖连接
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,内蒙古农业大学兽医学院
【基金项目】
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国家自然科学基金（30970122）
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目的：构建弗氏志贺菌cZp8基因的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达后，纯化带T7标签的ClpB蛋白。方法与结果：PCR扩增得到线性化表达载体pET24a与2574bp的c加曰基因片段，利用不依赖连接反应的克隆法（LIC）进行克隆，得到重组质粒pET-ClpB，转入大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达，通过一系列条件优化，确定可溶性表达条件为在30℃下、用1mmol／LIPTG诱导2h；利用抗T7单克隆抗体琼脂糖珠进行亲和纯化，得到了纯度很高的相对分子质量为95×10^3的ClpB-T7融合蛋白
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