【摘 要】
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目的 揭示Tbx18-Cre基因敲入小鼠Cre基因表达的保真性.方法用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)快速检测基因敲入小鼠外源基因Cre的相对拷贝数;Junction PCR验证基因敲入小鼠整
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目的 揭示Tbx18-Cre基因敲入小鼠Cre基因表达的保真性.方法用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)快速检测基因敲入小鼠外源基因Cre的相对拷贝数;Junction PCR验证基因敲入小鼠整合位点Tbx18-Cre的纯合性;利用Tbx18 Cre-/-纯合子小鼠模型验证Cre基因对下游基因的影响;利用Tbx18-Cre/Rosa26R-LacZ示踪模型,通过检测LacZ的表达,验证Cre基因的时空保真性.结果 实时荧光定量PCR验证Tbx18基因敲入小鼠外源基因Cre的相对拷贝数准确,Junction PCR验证其整合位点特异.Tbx18 Cre-/-纯合子小鼠模型能特异性阻断转录因子Tbx18的表达,引起信号下游基因CX40、CX43、CX45的表达明显升高.Tbx18-Cre/Rosa26R-LacZ示踪模型LacZ蛋白表达部位与Tbx18 mRNA表达部位一致.结论 Tbx18-Cre基因敲入小鼠中Cre基因具有高度准确的时空保真性和特异性.
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