目的:建立HPLC法同时测定云南重楼根茎中尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、胸苷、腺苷和2’-脱氧腺苷的含量。方法:采用Venusil MP C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水,梯度洗脱;流速1.0 m L/min;柱温35℃;检测波长260 nm。运用上述方法对15批云南重楼根茎进行测定,并对测定结果进行聚类分析和主成分分析。结果:测定了云南重楼根茎中9种核苷类成分的含量,在线性范围内线性关系良好(r>0.9995),平均加样回收率为96.80%~100.49%,RSD≤2.56%。15批云南重楼根茎中9种核苷类成分均可检测到,不同产地云南重楼根茎中9种核苷类成分的含量及组成结构比存在明显差异。采用聚类分析能将不同产地的15批云南重楼根茎分为2类。15批不同产地云南重楼根茎核苷类成分含量的聚类分析与主成分分析结果相似。结论:该方法简便、准确,重复性好,可用于不同产地云南重楼根茎中9种核苷类成分的含量测定。重楼核苷含量受产地、环境因素影响较大,云南重楼品质表现出一定的地域和生境依赖性。