【摘 要】
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目的 阐明次氯酸修饰白蛋白(HOC1-Alb)诱导血管内皮细胞炎性反应的机制.方法 用体外制备的HOCl-Alb与人脐静脉内皮细胞共同培养;用光泽精增强化学发光法测定NADPH氧化酶活性;
【机 构】
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南方医科大学珠江医院肾内科,郑州大学第一附属医院肾内科
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目的 阐明次氯酸修饰白蛋白(HOC1-Alb)诱导血管内皮细胞炎性反应的机制.方法 用体外制备的HOCl-Alb与人脐静脉内皮细胞共同培养;用光泽精增强化学发光法测定NADPH氧化酶活性;用免疫沉淀和Western印迹法测定p47phox磷酸化及p47phox与p22phox结合;用免疫荧光化学染色法观察p47phox膜迁移;分别用RT-PCR和Western印迹法测定细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA和蛋白表达.为了解NADPH氧化酶在HOCl-Alb上调ICAM-1表达过程中的作用,在HOCl-Alb刺激细胞前,在细胞培养液中预先加入NADPH氧化酶特异性抑制剂夹竹桃麻素(apocynin),观察ICAM-1表达的变化.结果 HOCl-Alb激活NADPH氧化酶具有剂量和时间依赖性,200 mg/L HOCl-Alb刺激15 min使NADPH氧化酶活性增加的量是牛血清白蛋白组的6.16倍(P＜0.01),并可诱导p47phox磷酸化和膜迁移,及其与p22phox结合.HOCl-Alb上调ICAM-1表达的作用可被夹竹桃麻素抑制,500μmol/L夹竹桃麻素对HOCl-Alb诱导的ICAM-1表达的抑制率为68.97%(P＜0.01).结论 NADPH氧化酶是HOCl-Alb诱导ICAM-1高表达的重要途径,与血管内皮炎性反应关系密切.
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