目的：建立可条件性诱导PLK1-shRNA稳定表达的食管癌细胞株，为深入研究PLK1在食管癌发生发展中的作用及分子机制提供细胞模型。方法：合成PLK1-shRNA寡核苷酸，退火后连接到慢病毒表达载体pLKO-Tet-On并转化至感受态细胞Stbl3，利用菌落PCR和测序分析鉴定阳性重组子。用pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒和包装质粒共转染293T细胞，收集病毒上清，感染食管癌细胞KYSE510，利用嘌呤霉素筛选可诱导PLK1-shRNA稳定表达的细胞株。采用qRT-PCR和Western blot检测强力霉素(Dox)诱导PLK1-shRNA表达的效率。结果：菌落PCR和测序分析结果显示，pLKO-shPLK1-Tet-On重组质粒中PLK1-shRNA的序列及插入位点正确。包装、收获病毒并感染KYSE510细胞后，筛选获得了具有嘌呤霉素抗性的稳定细胞株KYSE510-shPLK1-Tet-On。qRT-PCR和Western blot的检测结果显示，0.1μg/mL Dox即可显著下调KYSE510-shPLK1-Tet-On细胞中PLK1的表达。结论：成功构建了诱导型PLK1-shRNA慢病毒表达载体，并筛选获得了可条件性诱导PLK1稳定敲降的食管癌细胞株，为进一步探讨PLK1异常表达与食管癌发生发展的关系提供了理想的细胞模型。