【摘 要】
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以HIV-1TAR(Trans-acting response element)的PCR引物为自身模板,用PCR法直接扩增得到多拷贝的TARDNA同向串连体;构建了以HIV-1LTR(-158～+80)片段为启动子,含有4,8和15个拷贝
【机 构】
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中国医学科学院基础医学研究所,中国医学科学院基础医学研究所,中国医学科学院基础医学研究所,中国医学科学院基础医学研究所 中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室,北京 100005,中国
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以HIV-1TAR(Trans-acting response element)的PCR引物为自身模板,用PCR法直接扩增得到多拷贝的TARDNA同向串连体;构建了以HIV-1LTR(-158～+80)片段为启动子,含有4,8和15个拷贝的TAR DNA反义表达质粒;以荧光素酶基因为报告基因,检测了瞬时共转染体系中不同拷贝数的反义TARDNA转录产物对Tat反式激活作用的抑制作用。结果表明,反义多聚TAR RNA对Tat活性具有很强的抑制作用,其抑制程度与反义TAR串联体的拷贝数有关。
The PCR products were directly amplified by PCR using the primers of HIV-1TAR (Trans-acting response element) as a template. The multicopy TARDNA co-directional concatemers were constructed by direct PCR. The constructed HIV-1 LTR (-158 ~ +80) Promoter containing 4, 8 and 15 copies of TAR DNA antisense expression plasmid; using luciferase gene as a reporter gene, transient transfection system was detected in different copy number of antisense TARDNA transcript against trans transactivation Effect of inhibition. The results showed that antisense poly-TAR RNA had a strong inhibitory effect on Tat activity, and the degree of inhibition was related to the copy number of antisense TAR tandem.
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