目的基于ATR/Chk1/P53信号通路探讨三七总皂苷(PNS)对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用。方法将SPF级SD大鼠随机分为青年对照组(3月龄),衰老模型组(18月龄),PNS低、中、高剂量(10、30、60 mg/kg)组(18月龄),每组10只。PNS低、中、高剂量组大鼠分别ig给予PNS 10、30、60 mg/kg,每周6 d,给药6个月。结束时称体质量后处死大鼠,迅速取出睾丸组织,称取睾丸质量,计算睾丸指数。HE染色法观察睾丸组织形态学变化,免疫组化法检测DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、ATR的表达和定位,Western blotting检测睾丸组织中DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、Chk1、p-P53、P21的表达水平。结果与青年对照组比较,衰老模型组大鼠睾丸质量、睾丸指数显著降低,PNS能不同程度地升高睾丸质量、睾丸指数;HE结果表明,PNS能显著改善自然衰老所致的睾丸组织形态学变化;与青年对照组相比,衰老模型组大鼠睾丸组织DNA损伤标志蛋白γ-H2AX表达水平和阳性灶点数明显升高,ATR的阳性灶点数及其下游Chk1、p-P53、P21的蛋白表达明显升高,而PNS干预后可降低上述DNA损伤相关反应蛋白的表达。结论 PNS能够减轻自然衰老大鼠睾丸组织DNA损伤,其机制可能与调控ATR/Chk1/P53信号通路有关。